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western blot 膠是用什麼配制的

生活更新时间:2024-12-19 20:55:25

前面已經介紹過蛋白樣品的制備及濃度測定，今天給大家介紹凝膠制備相關問題:

現在一些SDS-PAGE凝膠制備試劑盒操作簡便，得到了廣泛的應用。在實驗室中，我們常用的凝膠制備試劑盒有碧雲天和雅酶的。它們有可調控膠濃度試劑盒，也有固定濃度（eg:10％）凝膠試劑盒。其中碧雲天凝膠試劑盒分離膠和濃縮膠都是無色透明狀，雅酶的濃縮膠是彩色的，更便于看清加樣孔。

[左上]一般我們采用1mm厚的玻璃闆制膠，将玻闆固定好确認其密封，配制分離膠（也叫下層膠）約5ml，緩緩注入玻闆中，然後覆蓋一水層，室溫靜置15～20min待膠凝固；去除水層，配制濃縮膠（也叫上層膠）約2ml，最後插上1mm的梳子，室溫靜置20min左右。

western blot 膠是用什麼配制的（WesternBlot實驗）1

在這裡值得注意的是，分離膠濃度的選擇與蛋白分子量大小、目的蛋白分子量等因素密切相關。同一條件下，膠濃度越高，所需電泳時間越長。蛋白分子量小的蛋白，通常膠濃度選大一些，反之亦然。如果實驗之前無法準确判斷膠濃度如何選擇，可以先用10％或12％的膠先做一次預實驗，後續再根據實際情況優化實驗條件。

濃縮膠一般是5％的濃度，不做其他濃度的調試。

膠注入玻闆時，應避免産生氣泡。在靜置待膠凝固時，可根據實驗室實際情況适當延長靜置時間，若凝膠時間短，可能會導緻電泳時出問題，進而影響實驗結果。

膠凝固好後，可拔出梳子，盡快将玻闆安裝于電泳裝置上，并在其電泳槽凹内加滿1x電泳緩沖液，以形成閉合回路保證電泳。（也可以先安裝固定玻闆，倒滿電泳緩沖液後再拔梳子）如若先拔梳子再加電泳緩沖液，可以使堵塞的膠孔有沖開的可能。

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