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細胞毒性實驗定性定量評價

生活 更新时间:2024-12-15 18:58:43

細胞增殖是活細胞的重要生理功能之一,是生物體的重要生命特征 ,是生物體生長、發育、繁殖以及遺傳的基礎。細胞增殖是指細胞在周期調控的因子下,通過DNA複制等反應,完成細胞分裂的過程。增殖檢測一般是分析分裂中的細胞數量的變化,進而反應細胞的生長狀态及活性,細胞增殖檢測主要分為四類:DNA合成檢測、代謝活性檢測、細胞增殖相關抗原檢測和ATP濃度檢測。

細胞活性是判斷體外培養細胞在某些條件下是否能正常生長的重要指标,如藥物處理、放射性或紫外線照射、培養條件變化等。細胞活性檢測指标通常包括細胞膜對核酸染料的通透性、代謝活性、膜電位等。

細胞毒性實驗定性定量評價(細胞增殖與毒性檢測實驗)1

細胞活性的檢測相當于細胞增殖能力的測定,采用特殊的試劑測定細胞的代謝活力或細胞代謝産物,通過檢測細胞的氧化還原活性反映細胞增殖能力,屬于間接檢測細胞增殖能力的方法。

下面簡單介紹一下MTT、MTS、CCK-8檢測的區别

MTT

MTT全稱 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽, 活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臜(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。對于細胞樣本加入MTT試劑反應,形成甲臜結晶。随後加入二甲基亞砜(DMSO)重新溶解細胞中的甲臜,得到紫色混合液。用酶标儀在490nm波長處測定其光吸收值。細胞存活率=(實驗組吸光度值-空白組吸光度值)/(對照組吸光度值-空白組吸光度值)*100%。

CKK-8

Cell Counting Kit-8(簡稱CCK-8)試劑可用于簡便而準确的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為:該試劑中含有WST-8【化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】,它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓒産物(Formazan dye)。生成的甲瓒物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。

細胞毒性實驗定性定量評價(細胞增殖與毒性檢測實驗)2

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