影響mtt法檢測細胞活力的主要因素?在制藥和臨床領域，支原體定量是采用CCU計數法即用“顔色改變單位(CCU) ”對支原體進行定量該方法主要是将支原體菌液10倍系列稀釋，然後接種在含酚紅的支原體肉湯培養基中，36°C±1°C 培養7～14天使培養基變色的最高菌液稀釋度定為1ccu/ml，現在小編就來說說關于影響mtt法檢測細胞活力的主要因素?下面内容希望能幫助到你，我們來一起看看吧!

影響mtt法檢測細胞活力的主要因素

在制藥和臨床領域，支原體定量是采用CCU計數法。即用“顔色改變單位(CCU) ”對支原體進行定量。該方法主要是将支原體菌液10倍系列稀釋，然後接種在含酚紅的支原體肉湯培養基中，36°C±1°C 培養7～14天。使培養基變色的最高菌液稀釋度定為1ccu/ml。

而在制藥領域，用PCR/qPCR方法對産品進行支原體檢查時，要求檢測方法的檢測限達到10CFU/ml。CFU即菌落形成單位，它代表着支原體在瓊脂培養基上的菌落數量，這是另外一種定量法。

這兩種定量法是否具有可比性？在2020年2月第4期的《衛生檢驗雜志》上，一篇名為《支原體菌落形成單位與顔色改變單位定量關系研究》的論文報告了兩種方法比較的結果。

在該研究中，作者用A8培養基培養解脲支原體（ATCC 33175）48小時，用支原體培養基培養人型支原體（ATCC 23114）72小時，用SP4培養基培養肺炎支原體（ATCC 29342）6天，然而觀察菌落的生長情況。

同時，作者将菌株凍幹粉複溶後進行梯度稀釋，接種到相應肉湯中。為降低誤差，作者對菌液采取了5倍系列稀釋，而非10倍。當培養至肉湯顔色不再變化時，最高稀釋倍數的菌液濃度即為1ccu/ml，然後根據稀釋倍數回算出菌液原液的濃度。

在進行CFU計數時，作者發現，典型支原體菌落的直徑是15mm~300mm。其中，人型支原體和肺炎支原體的菌落可以肉眼識别，而解脲支原體的菌落直徑隻有15mm~60mm，需要借助低倍顯微鏡才能看到并計數。

作者重複了10次，結果顯示，對于這3株支原體，CCU計數較為穩定，CFU計數則存在一定的波動。對于解脲支原體，CCU與CFU二者的計量結果接近，無顯著差異；而對于人型支原體和肺炎支原體，CFU計量數值略高于CCU計量數值，有顯著差異。

由于支原體在肉湯生長比瓊脂中要快，因此實際工作中CCU計數更為常見。作者認為，解脲支原體菌落較小，不容易計數，因而标準差較高。10倍稀釋對CCU計量的結果會造成一定誤差，因為實驗中培養基變色的最高稀釋度往往并不是能夠變色的最高稀釋度。降低稀釋倍數會減少誤差，但是會增加工作量。

在該實驗中，作者給出了三個菌株10次試驗的全部數據，因而可對CCU計數與CFU定量的結果進行比較，明确二者之間的關系。

對于制藥領域的支原體檢查，歐洲藥典規定，以PCR為代表的核酸擴增技術如果要替代培養法，其檢測限需至少達到10CFU/ml。

德國Minerva Biolabs公司（簡稱MB）提供有歐洲藥典規定的9種支原體的10CFUTM靈敏度标準品，經過精準标定，可用于PCR/qPCR的靈敏度驗證。

菌株均來自英國菌種保藏中心（NCTC），具有ATCC編号。

為避免給實驗室帶來污染，支原體均經過滅活，并且為凍幹粉形式，4℃保存，性能穩定。

每種支原體靈敏度标準品還提供有CFU與GC（基因組拷貝數）的換算數值（詳見質控證書）。

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