哪些因素會引起cpl數值下降?神奈川試驗（kanagawatest）即食品中副溶血性弧菌檢驗方法，屬于食品中微生物的檢驗，标準是GB/T 4789.7-2008-副溶血性弧菌檢驗神奈川試驗是在我妻氏瓊脂上測試是否存在特定溶血素神奈川實驗陽性結果與副溶血性弧菌分離株的緻病性顯著相關用接種環将測試菌株的3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂18h培養物點種表面幹燥的血瓊脂平闆每個平闆可以環狀點種幾個菌35士1攝氏度培養不超過24h，并立即觀察陽性結果為菌落周圍呈半透明環的β溶血，下面我們就來聊聊關于哪些因素會引起cpl數值下降?接下來我們就一起去了解一下吧!

哪些因素會引起cpl數值下降

神奈川試驗（kanagawatest）即食品中副溶血性弧菌檢驗方法，屬于食品中微生物的檢驗，标準是GB/T 4789.7-2008-副溶血性弧菌檢驗。神奈川試驗是在我妻氏瓊脂上測試是否存在特定溶血素。神奈川實驗陽性結果與副溶血性弧菌分離株的緻病性顯著相關。用接種環将測試菌株的3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂18h培養物點種表面幹燥的血瓊脂平闆。每個平闆可以環狀點種幾個菌。35士1攝氏度培養不超過24h，并立即觀察。陽性結果為菌落周圍呈半透明環的β溶血。

副溶血性弧菌有845個血清型，主要通過十三種耐熱的菌體抗原(即O抗原)鑒定，而七種不耐熱的包膜抗原(即K抗原)可以用來輔助鑒定，其緻病力可用神奈川(kanagawa)試驗來區分。該菌能使人或家兔的紅細胞發生溶血，在瓊脂培養基上出現β溶血帶，稱為"神奈川試驗"陽性。神奈川試驗陽性菌的感染能力強，多數毒性菌株為神奈川試驗陽性(K )，多數非毒性菌株為神奈川試驗陰性(Kˉ)。引起食物中毒的副溶血性弧菌90%神奈川試驗陽性，通常在12h内出現症狀。K 菌株能産生一種耐熱型直接溶血素，Kˉ菌株能産生一種熱敏型溶血素，而有些菌株能産生這兩種溶血素。

硫代硫酸鹽檸檬酸鹽-膽鹽-蔗糖（TCBS）瓊脂

3%氯化鈉胰蛋白胨大豆〔TSA）瓊脂

3%氯化鈉三糖鐵（TSI）瓊脂

嗜鹽性試驗培養基

3%氯化鈉甘露醇試驗培養基

3%氯化鈉賴氨酸脫狡酶試驗培養基

3%氯化鈉MR-VP培養基

我妻氏血瓊脂

氧化酶試劑

革蘭氏染色液

ONPG試劑

3%氯化鈉溶液

Voges-Proskauer（V-P）試劑

弧菌顯色培養基

API20E生化鑒定試劑盒或VITEKNFC生化鑒定卡

恒溫培養箱：36士1攝氏度；

冰箱2-5攝氏度；

均質器或無菌乳缽；

天平感量0.1g；

無菌試管：18mm*180mm,15mm*100mm；

無菌吸管：1mL(具0.01ml刻度）,10mL（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸頭；

無菌錐形瓶：500mL，250mL；

無菌培養皿：直徑90mm；

全自動微生物鑒定系統（VITEK）；

1.樣品制備

1.1冷凍樣品應在45℃以下不超過15min或在2-5攝氏度不超過18小時解凍，若不能及時檢驗應放于--15攝氏度左右保存；非冷凍而易腐蝕的樣品應盡可能及時檢驗，若不能及時檢驗，應置2-5攝氏度冰箱保存，在24h内檢驗。

1.2魚類和頭足類動物取表面組織、腸或鰓。貝類取全部内容物，包括貝肉和體液；甲殼類取整個動物，或者動物的中心部分，包括腸和鰓，如為帶殼貝類或甲殼類則應先在自來水中洗刷外殼并甩幹表面水分，然後以無菌操作打開外殼，按照上述要求取相應部分。

1.3以無菌操作取檢樣25g（ml），加人3%氯化鈉堿性蛋白胨水225mL，用旋轉刀片式均質器以8000r/min均質1min，或拍擊式均質器拍擊2min，制備成1：10的均勻稀釋液。如無均質器，則将樣品放人無菌乳缽中磨碎，然後放在500mL的滅菌容器内，加225ml3%氯化鈉堿性蛋白胨水，并充分振蕩。

2增菌

2.1定性檢測

将上述1:10稀釋液于36℃士1℃培養8h～18h。

2.2定量檢測

2.2.1用滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含右9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管内，振搖試管混勻，制備1：100的稀釋液

2.2.2另取1mL滅菌吸管，按上述操作依次制備10倍遞增稀釋液每遞增稀釋一次，換用一支lmL滅菌吸管.

2.2.3根據對檢樣污染情況的估計,選擇三個連續的适宜稀釋度，每個稀釋度接種三支含有9mL3%氯化鈉堿性蛋白胨水的試管，每管接種1mL。置36℃士1℃恒溫箱内，培養8h--18h

3分離

3.1在所有顯示生長的試管或增菌液中用接種環沾取一環，于TCBS平闆或弧菌顯色培養基平闆上劃線分離。一支試管劃線一塊平闆，于36℃士1℃培養18h-24h。

5.3.2典型的副溶血性弧菌在TCBSL呈圓形、半透明、表而光滑的綠色菌落，用接種環輕觸，有類似口香糖的質感，直徑2mm-3mm。從培養箱取出TCBS平闆後，應盡決（不超過1h）挑取菌落或标記要挑取的菌落。典型的副溶血性弧菌在弧菌顯色培養基上呈圓形、半透明、表面光滑的粉紫色菌落，直徑2mm-3mm。

4純培養

挑取三個或以上可疑菌落，劃線3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平闆，36℃土l℃培養18h-24h。

5初步鑒定

5.1氧化酶試驗：挑選純培養的單個菌落進行氧化酶試驗，副溶血性弧菌為氧化酶陽性。

5.2塗片鏡檢：将可疑菌落塗片，進行革蘭氏染色．鏡檢觀察形态。副溶血性弧菌為革蘭氏陰性，呈棒狀、弧狀、卵圓狀等多形态，無芽胞，有鞭毛。

5.3挑取純培養的單個可疑菌落，接種3%氯化鈉三糖鐵涼脂斜面并穿刺底層，35℃士1℃培養24h觀察結果。副溶血性弧菌在3%氯化鈉三糖鐵瓊脂中的反應為底層變黃不變黑，無氣泡，斜面顔色不變或紅色加深，有動力。

5.4嗜鹽性試驗：挑取純培養的單個可疑菌落．分别接種于不同氯化鈉濃度的胰胨水，36℃士1℃培養24h觀察液體混濁清況。副溶血性弧菌在無氯化鈉和10%氯化鈉的胰胨水中不生長或微弱生長，在7%氯化鈉的胰胨水中生長旺盛 [2] 。

6确定鑒定

6.1生化試驗：取純培養物分别接種含3%氯化鈉的甘露醇、賴氨酸、MR-VP培養基，36℃士1℃培養24h--18h後觀察結果。隔夜培養物進行ONPG試驗。

5.6.2API20E生化鑒定試劑盒或VITEK：刮取3%氯化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂平闆上的單個菌落，用生理鹽水制備成濁度适當的細胞懸浮液．使用API20E生化鑒定試劑盒或VITEK鑒定。

7報告

當檢出的可疑菌落生化性狀符合要求時，報告25g(ml)樣品中檢出副溶血性弧菌。如果進行定量檢測，根據證實為副溶血性弧菌陽性的試管管數，查最可能數（MPN）檢索表，報告每克(毫升）副溶血性弧菌的MPN值。

參考資料：

• 1 一起副溶血性弧菌引起的食物中毒病原學分析 ．知網．2011-04-25
• 2 副溶血性弧菌引發食源性疾病的病原學檢測及同源性分析 ．知網．2015-04-18

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