膠原蛋白是細胞外基質和結締組織中含量zui豐富的不溶性蛋白質。它可以在皮膚，肌腱，骨、軟骨、肌肉、玻璃體和韌帶等組織。有超過16種特征鮮明的類型膠原蛋白，但I型、II型和III型膠原蛋白在哺乳動物中的含量超過80%。本篇文章艾美捷将主要對膠原蛋白檢測試劑盒的實驗步驟以及膠原蛋白檢測試劑盒相關實驗工具進行簡單介紹。

一、膠原蛋白檢測試劑盒實驗步驟

1、樣品制備：組織或蛋白質/肽樣品：組織樣品（即肺）應在ddH2O中均勻化，使用100l。每10 mg組織使用ddH2O。向100l樣品勻漿中添加100l濃HCl（~12 M，未提供），并将其放入一個壓力合适的聚丙烯螺旋蓋小瓶中。在120°C下水解樣品3小時（見注釋C）。尿液：用等量水水解樣品壓力密封聚丙烯螺旋蓋小瓶中12m濃HCl（即100l尿液 100l HCl）的體積。之後均質，通過添加4 mg活性炭，用活性炭澄清樣品。以10000 x g的速度旋轉并離心3小時至少清除沉澱和活性炭。如果需要，重複上述步驟。将2-30l各水解樣品轉移至96孔闆中，并通過在熱闆/幹熱塊或微孔闆培養箱上70°C加熱闆蒸發至幹燥。

2、标準品制備：将25l膠原蛋白I标準品轉移到一個帶螺絲帽的壓力密封聚丙烯小瓶中，并添加25l膠原蛋白12 M濃鹽酸（未提供）。牢固擰緊蓋并在120°C下水解3小時。在冰上冷卻小瓶，然後旋轉小瓶内容物（zui終體積為50l，zui終濃度為1 mg/ml水解膠原蛋白）。添加0、2、4、6、8和10l的1mg/ml水解I型膠原标準溶液放入96孔闆中的一系列孔中，生成0、2、4、6、8和10的當量g膠原蛋白/孔。通過在熱闆/幹熱塊上70°C加熱闆，将标準曲線井蒸發至幹燥，或微孔闆培養箱。注：為防止微孔闆塑料翹曲/蝕刻，請勿将微孔闆暴露在J端溫度（>85°C）下。如果天氣炎熱使用平闆/烤箱時，我們建議将微孔闆放置在70°C下，直到内容物完全蒸發

3、反應：向每個樣品和标準品中添加100l氯胺T試劑，并在室溫下培養10分鐘。添加向每個孔中加入100l DMAB試劑，并在60°C下培養90分鐘。

4、測量：将闆從熱源上取下，并在560處測量所有樣品和标準曲線孔的吸光度端點模式下的nm（OD560）。對于zui大信号強度，在将闆從加熱爐中取出後20分鐘内測量吸光度

5、計算：對于膠原蛋白标準曲線，從所有标準中減去零标準（0μg/孔試劑空白）讀數，繪制背景減去值并計算标準曲線的斜率。對于測試樣品，減去零從樣品讀數中讀取标準（0μg/孔試劑空白），并将背景減去的OD560值應用于标準曲線，以在井中獲得Bμg膠原蛋白。

二、膠原蛋白檢測試劑盒相關科研工具介紹（艾美捷/BioVendor）

以上就是對膠原蛋白檢測試劑盒的相關科普，資料來源于艾美捷科技。

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