清潔分析方法驗證包括分析方法和取樣方法的驗證，通常用擦拭回收試驗來證明取樣方法的有效性，擦拭回收試驗如何做？擦拭溶劑如何選擇？為什麼方法回收率合格，而擦拭回收率不合格？此文讓大家知其然，知其所以然。

1 進行清潔分析方法驗證前，需要準備什麼？

1.1首先，需要知道殘留物控制限度。驗證部門人員依據設備表面積、産品批量等信息計算出殘留物的控制限度，QC人員以此當做100%的濃度。

1.2需要知道産品的清潔方法，主要關注使用的清潔溶劑，通常清潔溶劑應該能夠有效的溶解該産品的API，并且不能對設備和産品以及其他産品造成污染。

1.3選擇合适的棉簽，原則如下：

a. 能被擦拭溶劑很好的濕潤

b. 有一定的機械強度和韌性，足以對設備表面施加一定的壓力和摩擦力，并不易脫落纖維

c. 能同擦拭和萃取溶劑相互兼容，不對檢測産生幹擾

d. 質優價量（一定要考慮公司成本）

1.4選擇與車間生産設備表面材質相同的擦拭闆，表面要平整、光滑、幹淨。

2 如何建立清潔分析方法

一般采用實驗室已有的色譜條件進行。如可以參考含量或者有關物質的色譜條件進行(方便操作，節約儀器和色譜柱)。

3 清潔分析方法驗證包括哪些内容？

3.1對色譜分析方法驗證：專屬性、準确度、線性和範圍、定量限、檢測限、精密度

3.2對取樣方法進行模拟驗證：即所謂的取樣效率/取樣回收率。實際上是對棉簽的選擇、擦拭溶劑的選擇、取樣人員操作、殘留物轉移到棉簽、樣品萃取過程的全面考察。

4 清潔溶劑的選擇？

分類

部門

用途

選擇原則

清潔溶劑

車間

用于産品的清潔

有效溶解殘留物、不腐蝕設備、廉價、且本身易被清除。

擦拭溶劑

QC

為QC進行模拟取樣時，做擦拭回收率濕潤棉簽的溶劑

因為是模拟取樣，所以QC進行擦拭取樣回收率驗證時，所用的擦拭溶劑應該和後續QA取樣溶劑一樣。

1) 溶劑不得在設備上遺留有毒物質（不能污染産品、設備、環境等）

2) 應使擦拭取樣有較高的回收率（API溶解性好）

3) 不得對随後的檢測産生幹擾

4) 價格低廉（考慮公司成本）

稀釋劑

QC

用于稀釋樣品的溶劑

考慮供試品的溶解性、不能對檢測産生幹擾等等。

可以和擦拭溶劑相同，也可以和擦拭溶劑不同

取樣溶劑

QA

用于産品清潔後，取樣時濕潤棉簽的溶劑

取樣溶劑應該與擦拭回收率試驗中用到的溶劑一緻。不應該對産品和生産線造成二次污染，口服固體制劑的取樣溶劑一般為水或者無水乙醇。

5 擦拭回收試驗如何合理進行？

通常制備3個濃度（2LOQ、100%、200%）的待測溶液，均勻塗布在10*10cm2範圍内（每個濃度塗布2-3份），采用烘幹或者自然晾幹的方式使其幹燥，不同的2-3個人使用相同的棉簽蘸取擦拭溶劑，采用相同的擦拭方法進行擦拭回收試驗，計算回收率。

6 為什麼要制備3個不同濃度？

因為擦拭回收試驗主要是模拟設備殘留物較少（低于清潔限度）和較多（高于清潔限度）時，取樣方法的有效性。

7 最低濃度為什麼是2LOQ，而不是LOQ？

因為擦拭回收率受到取樣和檢驗的雙重影響，所以一般要求擦拭回收率大于50%或60%，如果最低濃度不是2倍的LOQ，可能會出現0.5-0.6倍的LOQ，低于LOQ就不能準确定量，所以為2倍（實際有可能是1.0-1.2倍）

8 為什麼需要2-3個不同人員進行試驗？

擦拭回收率試驗目的是考察不同取樣人員采用相同取樣方法，但是可能會受到擦拭力度、棉簽與設備接觸角度不同等影響而導緻取樣效果的差異，所以需要不同人員進行。

9 為什麼擦拭溶劑一定要和取樣溶劑一樣？

因為擦拭回收試驗的目的模拟取樣，證明取樣方法的有效性和重現性，所以擦拭溶劑要和取樣溶劑一緻。并且擦拭/取樣溶劑不能污染産品，不能幹擾檢測。

10 擦拭/取樣溶劑應該如何選擇？

選擇擦拭/取樣溶劑時，需要綜合生産工藝（使用到的溶劑等）、溶解性、溶劑的毒害性、避免引入污染物、企業成本等因素進行評估。擦拭/取樣溶劑不能對産品/設備造成污染，不能引入有毒害的有機溶劑或污染物。生産過程中通常不能使用有毒害的有機溶劑（如必須使用，則需要經過合理的風險評估，同時控制有機溶劑殘留量）。例如，固體口服制劑常見在濕法制粒或包衣時使用到乙醇（三類溶劑，低毒、對人類健康危害風險較低的溶劑）。基于以上原則，口服固體制劑常用水、乙醇或者二者的混合物作為清洗溶劑，故擦拭/取樣溶劑也隻能選擇乙醇、水或者二者的混合物，如果使用其他溶劑，則需要進行風險評估，同時控制溶劑殘留量。

11 擦拭回收試驗的可接受标準是什麼？

藥品生産驗證指南中一般不低于50%，業内常見不低于60%。

12 回收率不符合要求的主要原因有哪些？

a. 擦拭溶劑選擇不合适

b. 人員的擦拭力度（均勻用力）、擦拭速度（要快，防止溶劑揮發）影響

c. 擦拭路徑（要在塗布的10*10 cm2區域内）

d. 棉簽與闆的接觸角度太大，導緻接觸面積太小

e. 其它

以上為清潔分析方法驗證擦拭回收試驗中常見的疑問和解答。因指導原則、指南等均僅說了要進行驗證以及擦拭回收試驗，或者有一些概括性的描述，具體如何合理的做，是沒有具體規定或者描述的。所以隻有基于風險評估的基礎上合理的進行驗證。

最後，給大家分享一下在驗證文件中如何專業、合理的描述棉簽供試品處理方法的示例。

棉簽供試品處理方法

供試品溶液

精密量取1ml無水乙醇（擦拭溶劑，一定要與取樣溶劑相同，才能有效模拟取樣效果）至25ml具塞試管中，取一支空白棉簽，撚住棉簽杆（注意不要接觸棉簽頭的無紡布部分），将棉簽用試管裡的溶劑充分潤濕并在管壁輕輕瀝幹多餘溶劑（保持棉簽濕潤），使棉簽充分接觸設備取樣點表面，在取樣位置上10×10cm2的範圍内進行劃線（見下圖1），先用棉簽的一面做平行劃線，再以另一面垂直于原方向做平行劃線，然後将棉簽無紡布一端插入具塞試管口中，用剪刀剪掉手撚過的棉簽杆部分後丢棄，在具塞試管中加入稀釋劑9ml（稀釋劑可以與擦拭溶劑相同，也可以不同），加塞後振搖，超聲10分鐘，放冷至室溫，即得。

圖1 棉簽擦拭示意圖

參考文獻：

藥品生産驗證指南

ICH Q3C （R6）殘留溶劑指導原則

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