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酶切位點怎麼選擇

知識 更新时间:2025-02-02 09:47:10

  酶切位點的距離太小(小于10bp),影響限制性内切酶對切點的識别,不利于空載體的雙酶切。

  方法:

  1、一般目的基因用于克隆表達的情況下,酶切位點的選擇要考慮到:目的基因片段内部不含有所選的酶切位點(不然鑒定陽性重組子雙酶切時會将目的基因切斷)

  2、實驗後繼應用的所有載體(真核、原核、酵母、昆蟲)都盡可能含有所選的酶切位點.并且要保證在載體上的插入方向正确(定向克隆)。(不然換載體表達時,還要重新設計引物,以引進新的酶切位點。)

  3、盡可能選比較常用的酶切位點。

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