酶切位點的距離太小(小于10bp),影響限制性内切酶對切點的識别,不利于空載體的雙酶切。
方法:
1、一般目的基因用于克隆表達的情況下,酶切位點的選擇要考慮到:目的基因片段内部不含有所選的酶切位點(不然鑒定陽性重組子雙酶切時會将目的基因切斷)
2、實驗後繼應用的所有載體(真核、原核、酵母、昆蟲)都盡可能含有所選的酶切位點.并且要保證在載體上的插入方向正确(定向克隆)。(不然換載體表達時,還要重新設計引物,以引進新的酶切位點。)
3、盡可能選比較常用的酶切位點。
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