利用金屬的平衡相圖,确定不同要求的退火溫度,例如鋼材的再結晶退火,是在再結晶溫度區間加熱。
退火溫度為引物和模闆結合時候的溫度參數,當百分之五十的引物和互補序列表現為雙鍊DNA分子時的溫度,它是影響PCR特異性的較重要因素,在理想狀态下,退火溫度足夠低,以保證引物同目的序列有效退火,同時還要足夠高,以減少非特異性結合,合理的退火溫度從554度到70度,由于模闆DNA比引物複雜得多,引物和模闆之間的碰撞結合機會遠遠高于模闆互補鍊之間的碰撞,這就使PCR後期的過程成為可能。
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