pcr。标本間交叉污染、PCR試劑的污染、PCR擴增産物污染、實驗室中克隆質粒的污染。

　　1、标本間交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互間交叉污染；标本核酸模闆在提取過程中，由于吸樣槍污染導緻标本間污染；有些微生物标本尤其是病毒可随氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導緻彼此間的污染。

　　2、PCR試劑的污染：主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模闆污染。

　　3、PCR擴增産物污染：這是PCR反應中最主要最常見的污染問題。因為PCR産物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR産物污染，就可造成假陽就可形成假陽性。最可能造成PCR産物污染的形式是氣溶膠污染。在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠，在操作時比較劇烈地搖動反應管，開蓋時、吸樣時及污染進樣槍的反複吸樣都可形成氣溶膠而污染。據計算一個氣溶膠顆粒可含48000拷貝，因而由其造成的污染是一個值得特别重視的問題。

　　4、實驗室中克隆質粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質粒在單位容積内含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞内的質粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的生命力。其污染可能性也很大。

　　聚合酶鍊式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，它可看作是生物體外的特殊DNA複制，PCR的最大特點是能将微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、曆史人物的殘骸，隻要能分離出一丁點的DNA，就能用PCR加以放大，進行比對。這也是微量證據的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設想，1985年由其發明了聚合酶鍊反應，即簡易DNA擴增法，意味着PCR技術的真正誕生。到如今2013年，PCR已發展到第三代技術。1976年，中國科學家錢嘉韻，發現了穩定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術發展也做出了基礎性貢獻。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鍊，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鍊按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最适反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖（5-3）的方向合成互補鍊。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，複性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

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