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利用還原劑及反相高效液相色譜檢測奶粉中的含硫氨基酸

母嬰更新时间:2024-08-02 05:15:24

三鹿“三聚氰胺”毒奶粉事件已經過去多年，當年的給我國乳業帶來的空前沉重的打擊，催生了奶粉檢測技術的革新。但蛋白質各具特異性不同蛋白質中氨基酸組分不同，如何準确測定含奶粉中的硫氨基酸，微源檢測實驗室查閱文獻資料，實驗了一種使用二硫蘇糖醇做作為還原劑後進反相高效液相色譜的檢測方式。

利用還原劑及反相高效液相色譜檢測奶粉中的含硫氨基酸（利用還原劑及反相高效液相色譜檢測奶粉中的含硫氨基酸）1

二硫蘇糖醇（DTT）外觀白色固體，化學式為C4H10O2S2。是種小分子有機還原劑，還原性較強，主要應用于生物技術領域。

樣品前處理；準确稱量樣品，加人3.0mL6mol／L鹽酸溶液，低溫冷凍後氮氣吹幹，氮氣狀态下封口，120℃水解24小時。水解結束後取出，冷卻至室溫開封後用pH=9.0硼砂-硼酸緩沖液定容10mL，搖晃均勻後靜置離心操作，取上清2.0mL加入适量二硫蘇糖醇（DTT）等待反應結束，40℃氮氣吹幹，用pH=9.0硼砂-硼酸緩沖液溶解，搖晃均勻。

吸取上述1.0mL樣品溶液于具塞試管中衍生操作，振蕩後并加入5.0mLpH=9.0硼砂-硼酸緩沖液及2.0mL氯-3，5-二硝基三氟甲苯(CNBF）溶液，封口65℃水浴0.5小時。衍生結束後取出置于室溫，振蕩後加入15mLpH=7.0磷酸緩沖液，振蕩30s，靜置10min後取少量液體過0.22um微孔濾膜。

色譜柱	C18MGII(5μm，4.6mmi.d×250mm)；
流動相	A：乙腈；B：pH5乙酸-乙酸鈉緩沖液
檢測波長	240nm
流速	0.32mL／min
進樣量	20μL

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精确稱取奶粉樣品0.05g5份，分别加入40mmol／L蛋氨酸、胱氨酸标準溶液25μL、50μL、75μL，三次平行，操作同上。

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實驗數據基線平穩無雜峰含硫氨基酸峰高明顯增大，操作簡單，耗時少，适用于奶粉中含硫氨基酸的定量檢測。随着檢測技術的不斷發展，高效液相色譜法可以作為檢測乳品蛋白質摻假的标準流程方法。

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