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pcr的原理及條件

生活更新时间:2024-07-30 20:12:22

pcr的原理及條件?DNA的半保留複制是生物進化和傳代的重要途徑雙鍊DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鍊，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則複制成同樣的兩分子拷貝在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鍊，當溫度降低後又可以複性成為雙鍊因此，通過溫度變化控制DNA的變性和複性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外複制，我來為大家講解一下關于pcr的原理及條件?跟着小編一起來看一看吧!

pcr的原理及條件

DNA的半保留複制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鍊DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鍊，在DNA聚合酶的參與下，根據堿基互補配對原則複制成同樣的兩分子拷貝。在實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鍊，當溫度降低後又可以複性成為雙鍊。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和複性，加入設計引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外複制。

但是，DNA聚合酶在高溫時會失活，因此，每次循環都得加入新的DNA聚合酶，不僅操作煩瑣，而且價格昂貴，制約了PCR技術的應用和發展。

耐熱DNA聚合酶-Taq酶的發現對于PCR的應用有裡程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

PCR技術的基本原理類似于DNA的天然複制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：①模闆DNA的變性：模闆DNA經加熱至93℃左右一定時間後，使模闆DNA雙鍊或經PCR擴增形成的雙鍊DNA解離，使之成為單鍊，以便它與引物結合，為下輪反應作準備；②模闆DNA與引物的退火（複性）：模闆DNA經加熱變性成單鍊後，溫度降至55℃左右，引物與模闆DNA單鍊的互補序列配對結合；③引物的延伸：DNA模闆-引物結合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP為反應原料，靶序列為模闆，按堿基互補配對與半保留複制原理，合成一條新的與模闆DNA鍊互補的半保留複制鍊，重複循環變性-退火-延伸三過程就可獲得更多的“半保留複制鍊”，而且這種新鍊又可成為下次循環的模闆。每完成一個循環需2～4分鐘，2～3小時就能将待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。

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