細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用-tft每日頭條

細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用

科技更新时间:2024-11-20 21:25:45

溶源性細菌是指染色體上整合有前噬菌體并能正常生長繁殖而不被裂解的細菌，溫和噬菌體已被廣泛用于轉導、基因工程載體和分子生命科學等領域。利用細胞培養瓶可對細菌進行溶源性檢查，具體操作方法如下：

細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用（細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用）1

T225細胞培養瓶

1.溶源菌培養：将經LB斜面活化的大腸杆菌225（λ），接種于裝有20mlLB培養液的250ml細胞培養瓶内，30℃振蕩培養16h，再從中取2ml菌懸液接入另裝有20ml LB培養液的250ml三角瓶内，37℃振蕩培養2h至對數期。

2．排除遊離噬菌體：如待檢菌株為芽孢杆菌，可先制成孢子懸液，再經80℃ 10min處理，殺死溶源菌表面可能吸附的及遊離的噬菌體；如待檢菌抹為非芽孢杆菌，可利用噬菌體制備的抗血清或0.2%檸檬酸鈉溶液洗滌對數期溶源菌細胞，除去表面吸附的及遊離的噬菌體。然後經4000r/min離心10min，上清液可加人敏感指示菌做雙層平闆測定，用于檢驗樣品屮足孖钌遊離的噬菌體及吸附「溶源菌表曲的噬菌體，離心後的菌體細胞進行誘導處理。

細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用（細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用）2

T175細胞培養瓶

3.誘導溶源菌：離心後收集的菌體用無菌生理鹽水洗滌兩次，用生理鹽水或100mmol/l Tris-HCL緩沖液（pH7.0）制成終濃度為1011個/ml細胞的菌懸液，每皿加5ml菌懸液，經紫外燈30W，距離30cm、照射30s，立即加入5ml雙倍濃度的LB培養液，混勻後37℃黑暗中培養2h。

細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用（細胞培養瓶在溶源性細菌檢查中的應用）3

細胞工廠

4.溶源性菌株檢查：按雙層瓊脂法操作，取上述誘導裂解液加入幾滴氯仿，以10倍稀釋法适當稀釋，選擇後3個稀釋度的稀釋液，毎個稀釋液取0.3ml與0.2ml對數期敏感大腸杆菌226菌懸液混勻，再加入融化後冷卻至45℃的LB半體培養基，立即混勻，随即傾入LB固體培養基平闆上，待凝固後，37℃培養6h觀察。經過培養的平闆如果有大量噬菌斑出現就證明被檢菌株是溶源菌。

檢查細菌是否具有溶源性可按照以上步驟進行操作，操作時注意過程中的無菌性，避免因操作不當影響檢測結果。

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