無論氣相還是液相做定量分析都需要用到内标法或者外标法，那麼它們的定量依據是什麼，這兩者之間有什麼區别，什麼時候應該選擇哪一種方法。小七就一 一為你解答。

内标法與外标法的原理對比

圖片來源：儀器信息網

内标法是色譜分析中一種比較準确的定量方法，尤其在沒有标準物對照時，此方法更顯其優越性。内标法是将一定重量的純物質作為内标物(參見内标物條)加到一定量的被分析樣品混合物中，然後對含有内标物的樣品進行色譜分析，分别測定内标物和待測組分的峰面積(或峰高)及相對校正因子，按公式和方法即可求出被測組分在樣品中的百分含量。

那麼内标物如何選擇？

内标物的選擇原則

對于内标法定量分析來說，内标物的選擇是及其重要的。它必須滿足如下的條件：

1.内标物與被分析物質的物理化學性質要相似（如：沸點、極性、化學結構等）；

2.内标物應是該試樣中不存在的純物質；

3.它必須完全溶于被測樣品（或溶劑）中，且不與被測樣品起化學反應；并與試樣中各組分的色譜峰能完全分離；

4.能加入内标物的量應接近于被測組分；

5.色譜峰的位置應與被測組分的色譜峰的位置相近，或在幾個被測組分色譜峰中間。且又不共溢出，目的是為了避免儀器的不穩定性所造成的靈敏度的差異；

6.選擇合适的内标物加入量，使得内标物和被分析物質二者峰面積的匹配性大于75%，以免由于它們處在不同響應值區域而導緻的靈敏度偏差。

圖片來源：儀器信息網

外标法是儀器分析常用的方法之一，是比較法的一種。與内标法相比，外标法不是把标準物質加入到被測樣品中，而是在與被測樣品相同的色譜條件下單獨測定，把得到的色譜峰面積與被測組分的色譜峰面積進行比較求得被測組分的含量。外标物與被測組分同為一種物質但要求它有一定的純度，分析時外标物的濃度應與被測物濃度相接近，以利于定量分析的準确性。

内标法與外标法公式的對比

想要看懂内标法的計算。首先來分清兩個概念，絕對校正因子和相對校正因子。

以色譜分析為例，絕對校正因子是單位峰面積所相當的物質量，

fi’=mi/Ai。

而相對校正因子是某一組分與标準物質的絕對校正因子之比，

f= fi′/ fs′=As•mi/Ai•ms。

在内标法中，絕對校正因子主要由儀器的靈敏度決定，并且不易準确測量，也無法将内标物和待測物聯系起來；而相對校正因子才是定量的基礎，相對校正因子是那個一定的量，所謂待測物與内标的比一定也就是說待測物的質量與峰面積之比(即絕對校正因子fi’)和内标物的質量和峰面積之比(fs’)的比值一定。

文獻上，标準上看到的校正因子也都是相對校正因子。相對校正因子也可以通過已知量的标準和内标混合後經實驗測定獲得。

對相對校正因子的公式進行簡單變形，就能夠得到待測物質量

mi=Aifi’/Asfs’*ms，進而通過C=mi/m得到待測物的濃度。

因此，再見到各類内标計算公式，我們就能夠分辨其中的f到底是相對校正因子還是絕對校正因子了。比如

公式裡，fi、fs就是指絕對校正因子。

而為了避免測定校正因子，常采用内标标準曲線法。它以

mi= ms*fi*Ai /(fsAs) 為基礎，但有一個前提是加入恒定量的内标物，且進樣量相同(ms同)，這樣待測組分的含量就與Ai/As成正比了。mi=Ai/As*常數。

外标法的公式：

外标法也稱為标準曲線法，含量（cx）=cr*Ax/Ar

其中：cx為樣品濃度

cr為對照濃度

Ax為樣品峰面積

Ar為對照峰面積

以磺隆（乙草胺）的質量分數X1作為參考，按式（1）計算：

式中：A1── 标樣溶液中苄磺隆（乙草胺）峰面積的平均值；

A2── 試樣溶液中苄磺隆（乙草胺）峰面積的平均值；

m1──苄磺隆（乙草胺）标樣的質量，g；

m2── 試樣的質量，g；

P── 标樣中苄磺隆（乙草胺）的質量分數，%。

内标法與外标法實操常規步驟

繪制内标标準曲線，先将待測組分的純物質配成不同濃度的标準溶液，分别取一定量的标準溶液，加入相同量的内标物，混合後進樣分析，測出Ai和As，以 Ai/As為縱坐标，以标準溶液的濃度為橫坐标作圖。分析待測試樣，取與标準溶液相同量的待測試樣和内标物，測出峰面積比，由标準曲線即可查出待測組分的含量。

利用内标标準曲線法定量，可以免去測定校正因子的麻煩，也可以減少與查閱到的校正因子儀器條件等不同造成的差異，适用于液體試樣的常規分析。

1，單點定量法。（用此法的前提是待測組分的濃度和标液的濃度相差很小）

2，工作曲線法。（此法需注意色譜儀的設置參數和外部環境要盡量的不變，否則重複性不好）

單點定量法的具體步驟：首先，進标樣3到5次，剔除出偏差大的結果，然後在剩下的結果中算出平均值。再進待測樣品，用待測組分的峰面積（或者峰高）乘以标樣的濃度，再除以标樣的峰面積（或者峰高），這樣得到的數字就是待測組分的濃度。

工作曲線法步驟：首先，需要做一個工作曲線，進一系列不同濃度的标液，它們之間濃度差多少要具體讨論，一般是5個不同濃度就夠了。

然後，以濃度為橫坐标，以峰面積為縱坐标，畫出工作曲線（最好在電腦Excel上畫，可以自動拟合）。這個工作曲線做好後，可以用一段時間，注意校正就行。測定時，進待測樣品，得到峰面積，代入到工作曲線的方程中就可以直接得到待測組分的濃度。

注意：工作曲線的相關系數最少要達到0.999。

内标法與外标法的注意事項

内标法

1.當配制校正因子測定用的對照溶液和含有内标物質的待測組分溶液使用同一份内标物質溶液時，則配制内标物質溶液不必精密稱(量)取。

2.采用内标法定量時，内标物的選擇是一項十分重要的工作。

理想地說，内标物應當是一個能得到純樣的已知化合物，這樣它能以準确、已知的量加到樣品中去，它應當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一緻的物理化學性質(如化學結構、極性、揮發度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應特征。

3.需要指出的是，在少數情況下，分析人員可能比較關心化合物在一個複雜過程中所得到的回收率，此時，他可以使用一種在這種過程中很容易被完全回收的化合物作内标，來測定感興趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所說的選擇原則。

外标法

對樣品分析的操作條件，必須嚴格控制于繪制校正曲線時的條件。

1.當峰高對操作條件的敏感性以及對拖尾峰、柱子超負荷和檢測器有大的響應時，給出非線性的校正曲線，此時峰面積計算常常可以得到更好的結果。不過，對重疊峰，難以準确的測量峰面積，必須提高分離度才能達到預期的效果。

2.對于工廠的常規分析，使用外标法必須經常對校正曲線進行驗證。

3.如果曲線外推通過坐标原點，驗證時可以隻取一個點（進一次标準樣品）

4.注意進樣的重複性。使用注射器進樣，外标法的誤差大約在0.5% 以内。但是，使用定量進樣閥可獲得1%的精密度；若同時小心控制分離參數，分析精密度可達±0.25%。

内标法和外标法比較各有什麼特點？

内标法的特點及要求：

①内标法的準确性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大。

②内标法的缺點是操作程序相對煩瑣，每次分析時内标物和試樣都要準确稱量，不适合大批量試樣的快速分析，有時尋找合适的内标物也有困難。

外标法的特點及要求：

①操作簡單，計算方便，外标法不使用校正因子，适用于大批量試樣的快速分析，外标法适用于工廠中的常規分析，它用于衡量組分的分析也能得到滿意的結果；

②儀器随着使用會有所變化，因此需要定期進行曲線校正；

③對進樣量的準确性控制要求較高，否則造成分析誤差。

小七結語

如果采用外标法能夠滿足要求時，首選外标法。對于精密度要求比較高、結果準确度要求高時用内标法還是必要的。氣相色譜進樣重現性不如高效液相色譜，内标法定量較多，液相色譜大多采用外标法定量。

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