層析
chromatography
定義：基于不同物質在流動相和固定相之間的分配系數不同而将混合組分分離的技術。當流動相（液體或氣體）流經固定相（多孔的固體或覆蓋在固體支持物上的液體）時，各組分因沿固定相移動的速度不同而分離。該技術可用于微量樣品的分析和大量樣品的純化制備。
學科：生物化學與分子生物學_方法與技術
相關名詞：色譜法 純化 過濾
圖片來源：視覺中國
層析也稱色譜法。基于被分離物質分子在兩相（一為固定相，一為流動相）中分配系數的微小差别進行分離，是一種多級分離技術。當兩相做相對移動時，被測物質在兩相之間進行反複多次分離，使原來微小的分配差異進一步擴大，使各個組分分離。這一分離方法效率高、效果好，能将各種性質極相似的物質彼此分離。
層析可分為多種類型。根據移動相種類的不同，分為液體層析、氣體層析兩種。用作固定相的有矽膠、活性炭、氧化鋁、離子交換樹脂、離子交換纖維等，或是在矽藻土、纖維素等無活性的載體上附着适當的液體，也可使用其他物質。
層析是蛋白質分離純化的重要手段之一。一般而言，待分離蛋白質溶液（流動相）經過一個固态物質（固定相）時，根據溶液中待分離的蛋白質顆粒大小、電荷多少以及親和力如何等，使待分離的蛋白質溶液在兩相中反複分配，并以不同速度流經固定相而達到分離蛋白質的目的。
在蛋白質分離純化中，應用最廣的層析法是離子交換層析和凝膠過濾。
一、離子交換層析。蛋白質和氨基酸一樣，是兩性電解質，在某一特定pH時，各蛋白質的電荷量以及性質不同，可以通過離子交換層析得以分離。
二、凝膠過濾。又稱分子篩層析。層析柱内填滿帶有小孔的顆粒，一般由葡聚糖制成。蛋白質溶液加于柱之頂部，任其往下滲漏，小分子蛋白質進入孔内，因而在柱中滞留時間較長，大分子蛋白質不能進入孔内而徑直流出，因此不同大小的蛋白質得以分離。
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