原理

瓊脂糖是 D- 和 L- 半乳糖殘基通過 α (1→3)和 β (1→4) 糖苷鍵交替構成的線狀聚合物。L- 半乳糖殘基在 3 和 6 位之間形成脫水連接。瓊脂糖鍊形成螺旋纖維，後者再聚合成半徑 20~30 nm 的超螺旋結構。

材料與儀器

DNA 樣品 DNA 大小标準品

瓊脂糖溶液 電泳緩沖液 溴化乙錠或 SYBR Gold 染色液 凝膠載樣緩沖液

瓊脂糖凝膠電泳儀 封膠帶 微波爐或沸水浴 電源裝置 水浴

步驟

一、材料

1. 緩沖液和溶液

瓊脂糖溶液

電泳緩沖液（常用 1X TAE 或 0.5X TBE)

溴化乙錠或 SYBR Gold 染色液

6X 凝膠載樣緩沖液

2. 核酸和寡核苷酸

DNA 樣品

DNA 大小标準品

3. 專用設備

瓊脂糖凝膠電泳儀

封膠帶

微波爐或沸水浴

可以提供 500V 和 200mA 的電源裝置

55℃ 水浴

二、方法

1. 用封邊帶封住塑料托盤開放的兩邊或清潔幹燥的玻璃闆的邊緣形成一個模具，置一個水平支架上。

2. 配制足量的電泳緩沖液（1X TAE 或 0.5X TBE) 用以灌滿電泳槽和配制凝膠。

3. 根據欲分離 DNA 片段大小用電泳緩沖液配制适宜濃度瓊脂糖溶液：應準确稱量瓊脂糖幹粉加到盛有定好量的電泳緩沖液的三角燒瓶或玻璃瓶中。

4. 用 Kimwipes 松松地塞住三角燒瓶頸部，如用玻璃瓶一定松松地蓋住。在沸水浴或微波爐内加熱至瓊脂糖熔化。

5. 用隔離手套或夾子轉移三角燒瓶或玻璃瓶到 55℃ 水浴。待熔化的凝膠稍冷卻後加入溴化乙錠，終濃度為 0.5 μg/ml。輕輕地旋轉以充分混勻凝膠溶液。

6. 瓊脂糖溶液正在冷卻時，用一個合适的梳子形成加樣孔。梳齒的位置應在托盤底面上 0.5~1.0 mm，這樣瓊脂糖澆灌到托盤時将形成符合要求的加樣孔。

7. 澆灌溫熱的瓊脂糖溶液進入模具。

8. 讓凝膠溶液完全凝結，室溫下 30~45 min。加少量電泳緩沖液于凝膠頂部，小心拔出梳子。倒出電泳緩沖液。輕輕撕去封邊膠帶，将凝膠安放到電泳槽内。

9. 向電泳槽加入電泳緩沖液，剛好沒過凝膠約 1 mm。

10. 混合 DNA 樣品和 0.2 倍體積 6X 載樣緩沖液。

11. 用微量移液器及一次性吸頭，或拉長的巴斯德吸管，或玻璃毛細管将樣品混合液緩慢加至浸沒凝膠的加樣孔内。分子質量标準應分别加至樣品孔的左側和右側的兩個孔内。

12. 關上電泳槽蓋，接好電極插頭。DNA 應向陽極（紅色插頭）側泳動。給予 1~5 V/cm 的電壓，其中距離以陽極至陰極之間的測量為準。如電極插頭連接正确， 陽極和陰極由于電解作用将産生氣泡，并且幾分鐘内溴酚藍從加樣孔遷移進入膠體内。待溴酚藍和二甲苯氰 FF 遷移到适當距離後再停止電泳。

13. 當 DNA 樣品或染料在凝膠中遷移了足夠距離時，關上電源、拔出電極插頭和打開電泳槽蓋。若凝膠和緩沖液有溴化乙錠即用紫外燈觀察凝膠和照相。否則凝膠在含溴化乙錠（0.5 μg/ml) 的水或電泳緩沖液中室溫浸染 30~45 min, 或者用電泳緩沖液 1:10000 稀釋的 SYBR Gold 貯備液浸染。

注意事項

在使用微波爐進行加熱溶解的過程中要注意緩沖液蒸發導緻膠濃度增高，這時可以加入适量緩沖液補齊濃度。

常見問題

不同濃度的瓊脂糖凝膠對核酸的分離效果不一，因此要根據核酸分子大小，選擇合适孔徑的瓊脂糖凝膠。

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