原理:
DNA聚合酶鍊式反應技術簡稱PCR技術,是一種以模闆DNA為基礎,在引物和4種脫氧核糖核苷酸存在的條件下,利用DNA聚合酶的酶促反應,完成對模闆的目的片段的快速擴增的過程。
步驟為:
(1)變性:雙鍊DNA在94℃條件下,通過熱變性使模闆的雙鍊DNA氫鍵斷裂變成單鍊。
(2)複性:當變性溫度突然降至引物Tm值(通常為35~65℃)以下時,會使引物與模闆DNA互補序列雜交。由于引物一般由10~25個堿基序列,模闆DNA結構遠比引物分子複雜,且反應體系中引物分子的濃度又遠大于模闆DNA,故在退火溫度時,引物與模闆DNA容易結合形成互補鍊。
(3)延伸:在DNA聚合酶的作用下,以DNA為模闆和以4種脫氧核糖核苷酸為原料,在Mg2+存在的條件下。DNA聚合酶依賴于其5'→3'的聚合酶活力,以引物結合于DNA模闆鍊為起始點。使引物的序列得以延伸,合成模闆DNA的互補鍊。
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