革蘭氏染色的原理是通過結晶紫初染和碘液媒染後,在細胞壁内形成了不溶于水的結晶紫與碘的複合物,革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網層次較多且交聯緻密,故遇乙醇脫色處理時,因失水反而使網孔縮小,再加上它不含類脂,故乙醇處理不會出現縫隙。
因此能把結晶紫與碘複合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類脂含量高、肽聚糖層薄且交聯度差。
在遇脫色劑後,以類脂為主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖網不能阻擋結晶紫與碘複合物的溶出,因此通過乙醇脫色後仍呈無色,再經沙黃等紅色染料複染,就使革蘭氏陰性菌呈紅色。
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