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枯草芽孢杆菌擴大培養的詳細步驟

科技 更新时间:2024-07-29 23:11:53

  文/圖 中國水産頻道 周雙豔整理

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  芽孢制劑我們已經用了很久了,通常我們大家都知道枯草芽孢杆菌,今天講的還包括地衣和短小。

  芽孢是一種無莢膜,周身鞭毛,能夠運動的革蘭氏陽性菌。它的個體相對來說比較小,橢圓到柱狀,位于菌體中央或稍偏,芽孢形成後菌體不膨大。在液體培養基中生長時,常形成皺。可廣泛分布在土壤及腐敗的有機物中,很容易在枯草浸汁紅大量繁殖,因此而得名。

  枯草芽孢杆菌是一種兼性耗氧菌,一個是喜好,一個是消耗,它喜好有氧氣也消耗大量的氧氣。在無氧的環境中基本不能萌發,但是它的營養體可以部分存活,隻不過它的淨水功能會減退。這一點大家要注意,并不是在缺氧的環境下它就不能存活,雖然在無氧的條件下,休眠體雖然不能萌發,但是營養體依然能夠存活下來。

  根據2008年1126号公告這裡面批準使用的安全微生物隻有兩種芽孢,一種是枯草芽孢,一種是地衣芽孢,今天我們還加上了一個短小。根據在實踐當中得到的結論是枯草配地衣、配短小芽孢杆菌,按照一定的比例之後,比單用枯草、地衣、短小的效果好。

  

  菌種的來源

  菌種的來源我就不介紹了,因為前面已經講過了。

  

  

  

  

  

  拌料内服的主要作用:

  1、芽孢本身在消化道中是存在的,菌體自身合成酶類,在消化道中與動物體内的消化酶類一同發揮作用;促進飼料中營養素的降解,也就是降低飼料系數,所以很多飼料生産企業在生産飼料的過程當中會添加芽孢制劑,不用擔心它的耐受性,因為顆粒飼料的生産過程當中溫度會達到121度,雖然很短暫,但是它會達到這樣一個溫度,膨化飼料的生産過程中達到的溫度更高。但是大家記住了,芽孢會被殺死,因為芽孢杆菌特别能耐高溫,121度要10-30分鐘才能殺死一部分芽孢;

  2、能合成多種B族維生素,提高動物體内幹擾素和巨噬細胞的活性來刺激動物免疫器官的生長發育,激活T、B淋巴細胞,提高免疫球蛋白和抗體水平,增強細胞免疫和體液免疫功能,提高水産養殖對象的群體免疫力,這個是很關鍵的,當然這個是我們肉眼看不到的,所有我們的飼料中添加芽孢的好處,養殖戶是看不到的。

  

  3、芽孢菌體生長過程中産生的枯草菌素、多粘菌素、制黴菌素、短杆菌肽等活性物質,這些活性物質對緻病菌或内源性感染的條件緻病菌有明顯的抑制作用;在腸道中降低腸炎的發生率,和乳酸菌有類似的功能,乳酸菌和芽孢杆菌在腸道内起到互相促進的作用。

  

  4、迅速消耗環境中的遊離氧(在體内),造成腸道低氧,促進有益厭氧菌生長,并産生乳酸菌等有機酸類,降低腸道pH值,間接抑制其它治病菌生長。

  從這個意義上來講,在飼料中添加芽孢杆菌,可以有效的降低飼料系數,能夠一定程度上降低細菌性疾病的發病率。

  用于水體環境的主要作用

  其實它就是一個淨水的功能,能夠分解各種有機質,綜合淨化水環境,改善過肥的水質。芽孢杆菌的營養體是耗養菌,它到底有多耗養,有我們想象中的那麼耗養嗎?有那麼可怕嗎?其結果是否定的。其實芽孢杆菌雖然耗養,但是沒有我們傳聞當中厲害,消耗那麼多得氧氣。我要正面宣傳一下,它的耗養和減少耗養物質是有關聯的。

  在很多情況下,我們的老百姓包括一部分從業人員,隻看到了芽孢杆菌是耗養菌,但沒有看到芽孢杆菌這類物質分解大量的原本也需要消耗氧氣的有機質。實際上,分解有機質的過程,雖然芽孢杆菌在消耗氧氣,但是如果它不分解這些有機質,有機物沉到水底或者懸浮在水體中難道它們就不耗養嗎?因此,芽孢杆菌雖然耗養,但它也消耗了原本也要消耗氧氣的有機質。所以它并沒有我們想象中的那麼可怕。

  

  芽孢杆菌的應用範圍

  目前芽孢制劑的應用主要在

  1、污水處理、工業循環水處理,腐化槽、化糞池等處理,畜牧養殖動物廢料、臭味處理,糞便處理系統,垃圾、糞坑、糞池等處理;

  2.畜牧、家禽、特種動物及寵物養殖,水産養殖也在用;

  3.還可以與多種菌種混配,在種植業、土壤當中也起到了非常重要的作用。

  

  相關的問題

  1.枯草芽孢杆菌的菌體和芽胞的關系;

  所謂的菌體指的是營養體,就是已經萌發出來的。形成的芽孢實際上是休眠體,芽孢的表面有一層厚厚的莢膜,它能耐高溫、耐腐蝕、耐化學制劑的清洗。用消毒劑去殺芽孢要很長的時間才能殺死它,用消毒劑去殺病毒或者細菌相對來說更容易得些,而殺死産生芽孢的這種菌相對來說就難多了,要用更長的時間和較高的濃度。

  那麼到底休眠體的芽孢和營養體的芽孢杆菌有什麼區别,他們之間的關系又是什麼呢?

  大家都知道西遊記,西遊記的第一章第一回,孫悟空是從一塊石頭裡面蹦出來的,這塊石頭我們可以理解為這個芽孢杆菌形成的休眠體,就是芽孢。他蹦出來之後就是活的了,就是營養體的芽孢杆菌,這就是他們之間的關系。孫悟空在石頭裡面的時候用子彈打他、刀去砍他都沒事,不會受影響,孫悟空一旦蹦出來以後槍還是可以打死的。

  換句話說休眠體的芽孢萌發成為營養體的活菌的時候,它更容易死亡掉。因為休眠體的芽孢(就是現在賣的芽孢粉劑)變成營養體後就是活的,活的就會受到環境因素的影響,以及其它所有的不利因素對它的的影響,比如講缺乏營養、溫度過高、溫度過低和紫外線的侵襲,都可能造成不可逆的損傷,導緻它的死亡。

  2.與地衣、短小芽孢杆菌合用的比例;

  這是一個商業機密的問題,可能在這裡我不能跟大家說的清楚。因為很多企業都在研究這個問題,到底怎麼樣去用,什麼樣的比例才能夠發揮更好的功效,這是一個商業機密。

  3.與沼澤紅假單胞菌搭配使用改良水質效果明顯;

  如何和其它的有益菌搭配這是一個很科學的問題,一般來講,在天晴的時候,早上日出後盡早的使用沼澤紅假單胞菌,比如講6點天氣亮了就可以用了,到了中午12-1點之間再使用一次芽孢杆菌,這樣對于水質的改良有明顯的效果。

  4. 存放要求;

  一定是幹燥、通風、陰涼處。一定把幹燥放在第一位,大家注意潮濕的環境芽孢容易萌發。

  5.水體中正确的使用時間溶氧條件;

  這個很重要,和耗養是有關系的。水體中正确的使用時間通常是在中午這個時段。

  溶氧的條件我告訴大家,無論是一天24小時的任何一個時間段,我們測量底層水(指的是養殖池塘,湖泊或者更深的水庫就沒法做了),隻把水測到3米深,底層水溶氧,比如早上8點鐘的時候去測底層水溶氧達到或者超過4mg/L。在這樣的一個條件下,無論今天是不是下雨,還是天晴,我認為都可以大膽的使用芽孢。

  6.夏季大風大雨過後,天氣轉晴時使用是良機。

  為什麼,在這個時候使用效果是最好的,因為大風大浪過後,水體可能發生了垂直交換,底下的有機質可能都會攪起來了,懸浮在水體當中比較多,這時候我們使用芽孢更能夠發揮芽孢的作用,實際上我要給大家說一個很好的辦法,就是在什麼時候使用芽孢有說服力。

  一般來講,我在使用芽孢的時候一定有一個前提條件。第一就是溶氧要達到,第二、我一定會在養殖戶的池塘邊,在任意一個點,用一個白色的塑料桶,打半桶水上來,靜置15-30分鐘,有的15分鐘就夠了,放上15分鐘之後,你就會發現桶底會不會有沉澱。桶底明顯有沉澱,我就要用芽孢了,如果靜置30分鐘一點都沒有得話,我可能就選擇不會用芽孢,為什麼呢?有沉澱物說明這個水體中懸浮的有機質特别多。

  這個情況使用芽孢制劑,今天中午12點用了,明天再去看,同樣的地點用白色塑料桶打半桶水,方式15-30分鐘,桶底沒有沉澱了,說明這些沉澱物質可能就被我們的芽孢杆菌消耗掉了。這就是證明用芽孢有沒有效的簡單的方法。每個人都可以判斷的。

  

  關于芽孢的使用

  我們以2000億枯草芽孢杆菌原粉為水體用量标準

  正常的水質調控使用量:5克/畝.米

  一般的生成企業我們把枯草芽孢杆菌的原粉提供給他之後,建議使用100-300目的沸石粉為載體稀釋成200億級或100億級的成品再使用于水體,這是一個通行的方法。

  可用于糞肥等有機質的有氧發酵!也是可以的,但是養殖戶一般不具備生産擴培條件。

  

  芽孢的活化

  活化的目的其實是激活休眠體讓它變成營養體,有可能的情況下獲得更多的營養體,迅速提高。一個芽孢變成一個營養體需要的條件:溫度适宜,有充足的氧氣,有水分、有它的食物——培養基,但是大家想一想我們養殖戶的活化芽孢的條件能否達到我們上面說得4個條件。

  我們有一線工作經驗的同志們可能就知道了,我們養殖戶在活化芽孢的時候用紅糖水一泡,可是你想過沒有你的紅糖水在泡的過程中裡面的溶氧有多少,會不會都消耗掉了。如果芽孢休眠體在有培養基、有水分、溫度也适宜,剛開始有一定氧氣下的條件下,它迅速被激活了,你想想它變成營養體了,突然氧氣消耗掉了,底層的芽孢活菌可能會死掉,它都來不及變成休眠體就會死掉,因此活化的結果不見得是我們預期的那樣。

  因此科學的活化芽孢應該是在活化的容器裡面一定要增氧和攪拌。攪拌的目的讓培養基和菌種充分的混合均勻,增氧的目的就是不斷的提供氧氣,讓更多的芽孢長出來。

  當然這個時間也很科學,因為芽孢從休眠體萌發變成營養體是需要很長時間的,不是半個小時、一個小時,根據不同的菌種,萌發的時間長短不一。每個公司拿到的菌種菌株型可能不一樣。在這裡我不好說一個準确的時間,

  我們做出來的芽孢成品,我們建議不用活化,直接使用。和别的公司是不是有區别,我不敢說,因為沒有檢測。我們的産品不用活化,一定有效。

  

  枯草芽孢杆菌的擴培

  固體發酵:用餅粕、麸皮、米糠等培養基和菌種攪拌均勻。

  相對來說堆積的高度越低,産生的熱量更容易散發出去。因為我們實測結果是堆積物料過高的地方,溫度可能達到70度了,發酵的過程中産生大量的熱能,無法有效的散發出去,所以我們在芽孢的固體發酵的過程當中,所以一定要注意定期攪拌、底部通風、散熱。

  固體發酵的缺點,獲得産品菌數不穩定,一般200億個/克左右。所以一般不建議養殖戶去擴培芽孢甚至不建議養殖戶用不科學的方法去活化芽孢。

  液态發酵:使用發酵罐投入培養基密閉恒溫發酵(增氧),獲得産品菌數穩定,菌數可以達到萬億級别。

  

  我還得重複一下之前講過的一段話。因為它非常重要。在我們使用各種有益的微生物制劑,用到水體當中,希望得到的結果是好的,但是我們投入的芽孢、光和細菌、乳酸菌等活菌真正的能夠在水體當中長時間的大量存活和增殖嗎?這個答案是否定的,尤其是乳酸菌存活的時間相對來說更短一些,而芽孢和光合細菌存活的時間相對來說長一些,他們有些能夠增殖,能夠定殖。但是由于環境的改變的,他們的菌種出現了功能上的衰退。

  由于菌體在水環境當中和我們之前的給它一個充足的定向培養基,給它一個恒溫的條件,沒有競争者的條件,在這裡兩者不同的環境下,投入到水體中的活菌,都會在相對來說短時間内發生變異,功能上也會發生轉變,也就不能夠達到我們的預期。因此我們投入一次,可能過一段時間又得重新投一次。實際上,他們本身能夠發生一定的功能之外,更大的發揮功能的地方是在它們的代謝産物,它們的代謝産物促進了土著微生物的大量的繁殖。

  因此我一直在講我們投入的活菌制劑實際上起到了一個藥引子的作用,大家想一想,我們投入的菌,就那麼多,分散到水體當中實際上市很少的,量并不多。但是為什麼它們起到了明顯的這樣那樣的作用,藥引子的作用,四兩撥千斤。

  

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