鍊球菌普遍存在于各種動物體内，大多數是宿主特異性的，不同的菌株感染不同種動物。鍊球菌可導緻一系列的疾病，包括腦膜炎、敗血症、多發性漿膜炎、關節炎、心内膜炎和肺炎。鍊球菌在鼻炎和流産的病例中也曾被分離到，說明它還和這兩種病症有關。鍊球菌感染發病模式與嚴重程度因不同地區而異。鍊球菌有很多個血清型，其中豬鍊球菌至少有34個血清型。它們在緻病性和臨床症狀方面各不相同，且同一血清型的緻病性和臨床症狀在不同情況下也會有不同表現。有些血清型主要是從健康豬體内分離得到的，不具緻病性；有的主要造成肺部損傷；有的可感染豬，也可感染其他動物。有的血清型，主要是2型，不僅可導緻豬腦膜炎，偶爾還會造成人腦膜炎。

1 病原學特征

1.1 形态與染色

鍊球菌呈球形或卵圓形，直徑0.6～1.0μm，呈鍊狀排列，短者由4～8個細菌組成，長者由20～30個細菌組成，鍊的長短與細菌的種類和生長環境有關。在液體培養基中易呈長鍊，在固體培養基中常呈短鍊，由于鍊球菌能産生脫鍊酶，所以在正常情況下鍊球菌的鍊不能無限制地延長。多數菌株在血清肉湯中培養2～4h易形成透明質酸莢膜，繼續培養後莢膜可被細菌自身産生的透明質酸酶分解而消失。該菌不形成芽孢，無鞭毛，易被普通的堿性染料着色，革蘭氏染色（圖2-4）陽性，長時間培養或被中性粒細胞吞噬後轉為革蘭氏染色陰性。

1.2 培養特征

需氧或兼性厭氧菌，對營養的要求較高，在普通培養基上生長不良，需補充血清、血液、葡萄糖等才能生長。最适生長溫度為37℃，在20～42℃下能生長，最适pH為7.4～7.6。在血清肉湯中易呈長鍊，管底呈絮狀或顆粒狀沉澱生長。在血平闆上形成灰白色、半透明、表面光滑、邊緣整齊、直徑0.5～0.75mm的細小菌落，不同菌株有不同溶血現象（圖2-5）。

1.3 生化反應

分解葡萄糖，産酸不産氣，對乳糖、甘露醇、水楊苷、山梨醇、棉子糖、海藻糖、七葉苷的分解能力因不同菌株而異。一般不分解菊糖，不被膽汁溶解，觸酶試驗陰性。

1.4 抗原結構

鍊球菌的抗原構造較複雜，主要有三種：

（1）核蛋白抗原 或稱P抗原，無特異性，各種鍊球菌均相同，與葡萄球菌有交叉。

（2）多糖抗原 或稱C抗原，為群特異性抗原，是細胞壁的多糖組分，可用稀鹽酸等提取。應用多糖抗原，根據蘭氏（Lancefield）血清學分類，可将鍊球菌分成許多群。目前有A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U19個血清群，每個血清群又有若幹個血清型。根據菌體莢膜抗原特性不同，豬鍊球菌共可分成35個血清型，即1～34型和同時含有1型和2型抗原的1/2型。

（3）蛋白質抗原 或稱表面抗原，具有型特異性，位于多糖抗原外層，其中可分為M、T、R、S4種不同性質的抗原成分。與緻病性有關的是M抗原，M抗原具有抗吞噬作用，并使鍊球菌易于黏附在上皮細胞上。根據M抗原不同可将A群鍊球菌分為60多個血清型。R、T、S抗原與緻病性和毒力關系不大，但可用于鍊球菌的分型。

1.5 分類

根據鍊球菌在血液培養基上生長繁殖後是否溶血及其溶血性質，将其分為三類。

1.5.1 α-溶血性鍊球菌

菌落周圍有1～2mm寬的草綠色溶血環，也稱甲型溶血性鍊球菌，這類鍊球菌多為條件緻病菌。

1.5.2 β-溶血性鍊球菌

菌落周圍形成一個2～4mm寬、界限分明、完全透明的無色溶血環，也稱乙型溶血性鍊球菌，這類菌亦稱為溶血性鍊球菌，該菌的緻病性強，常引起人類和動物的多種疾病。

1.5.3 γ-鍊球菌

不産生溶血素，菌落周圍無溶血環，也稱為丙型或不溶血性鍊球菌，該菌無緻病性，常存在于乳類和糞便中，偶爾也引起人或動物感染。

1.6 抵抗力

該菌抵抗力一般不強，60℃經30min即被殺死，對常用消毒劑敏感，在幹燥塵埃中可生存數月。乙型鍊球菌對青黴素、紅黴素、氯黴素、四環素、磺胺均敏感。βＧ内酰胺類藥物是鍊球菌感染的首選藥物。

2 流行病學特征

鍊球菌在自然界中分布較廣，存在于水、空氣、塵埃、糞便及健康人和動物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通過直接接觸、空氣飛沫傳播感染或通過皮膚、黏膜傷口感染，被污染的食品如肉、蛋、乳及其制品也會感染人類。上呼吸道感染患者、人畜化膿性感染部位常成為食品污染的污染源。

3 危害

鍊球菌種類多，與人類有密切關系的是豬鍊球菌。在豬鍊球菌衆多血清型中，2型鍊球菌是豬的最主要病原，緻病性最強。鍊球菌的緻病性與溶菌酶釋放蛋白、胞外蛋白因子、溶血素等毒力因子有關。

在我國，2005年四川部分地區發生的2型豬鍊球菌病暴發流行導緻200多人感染、38人死亡。在荷蘭，每年屠宰場的工人和養殖場飼養員患豬鍊球菌腦膜炎的比率大約為3/100000，是不在屠宰場工作的人患豬鍊球菌腦膜炎的1500倍，屠夫患豬鍊球菌腦膜炎的比率為1.2/100000。在德國，屠夫、屠宰場工人和肉品加工廠工人是豬鍊球菌在鼻咽部定居的高危人群。在新西蘭，1980年以後的研究顯示9%的奶牛場主、10%的肉品檢驗員及21%的豬場主對豬鍊球菌2型血清反應為陽性，表明一些人有亞臨床感染。

4 檢測方法

包括病原的分離鑒定方法及分子生物學方法、免疫學方法ELISA等。

4.1 分離鑒定方法

4.1.1 樣品處理

取25g（或25mL）待檢樣品，加入225mL滅菌生理鹽水，制成混懸液。

4.1.2 接種培養

吸取5mL混懸液接種至50mL葡萄糖肉浸液肉湯中，或直接劃線于血平闆上（如待檢樣品污染嚴重，可同時接種5mL至匹克氏肉湯中），36℃培養24h，接種于血平闆上，36℃培養24h，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平闆上分純，觀察在液體和固體中的培養特征、溶血情況及革蘭氏染色、形态，并進行環磷酸腺苷（CAMP）試驗、鍊激酶試驗和杆菌肽敏感試驗。

4.1.3 CAMP試驗

在血瓊脂平闆上用金黃色葡萄球菌培養物劃一條直線，然後将鍊球菌培養物劃一條線，與金黃色葡萄球菌培養物的劃線相互垂直，但不要接觸，二者相距3～5mm，各鍊球菌分離菌劃線間距10～20mm。置37℃溫箱内培養24h後觀察結果。在兩劃線交界處出現箭頭樣的溶血區為陽性。

4.1.4 鍊激酶試驗

吸取草酸鉀血漿0.2mL，加0.8mL滅菌生理鹽水，混勻，再加入鍊球菌18～24h36℃肉浸液肉湯培養物0.5mL及0.25%氯化鈣0.25mL，混勻，36℃水浴10min，血漿混合物自行凝固，觀察凝塊重新完全溶解的時間，完全溶解為陽性，如24h後不溶解即為陰性。同時用肉浸液肉湯做陰性對照，用已知的鍊激酶陽性的菌株做陽性對照。

4.1.5 杆菌肽敏感試驗

取典型菌落的菌液塗布于血平闆上，用滅菌鑷子夾取每片含有0.04U的杆菌肽紙片置于上述平闆上，36℃培養18～24h，如有抑菌圈出現即為陽性。用已知的陽性菌株做對照。

4.2 分子生物學方法

挑取單個可疑菌落接種于Luria-Bertani（LB）肉湯培養基中，37℃振蕩培養過夜，取1.0mL菌懸液于1.5mL離心管中，用冷凍離心機12000r/min離心10min，棄去上清液，再加入1.0mL滅菌雙蒸水，渦旋制成菌懸液，放入水浴鍋中煮沸10min，3000r/min離心5min，以上清液為模闆進行擴增。上遊引物為：5′-GTACAGTTGCTTCAGGACGTATC-3′，下遊引物為：5′-ACGTTCGATTTCATCACGTT-3′。反應體系：10×buffer5μL，TaqDNA聚合酶（5U/μL）1μL，MgCl2溶液（25mmol/L）3μL，dNTP（2.5mmol/L）4μL，上遊引物（10μmol/L）1μL，下遊引物（10μmol/L）1μL，模闆5μL，用ddH2O補至50μL。反應條件：95℃預變性5min，94℃變性1min，59℃退火1min，72℃延伸45s，共作用35個循環，72℃再延伸5min。PCR産物用1.5%的瓊脂糖在100V條件下進行電泳，得到擴增長度為197bp的擴增産物為鍊球菌陽性。

4.3 ELISA

4.3.1 包被

用0.05mol/LpH9.0碳酸鹽包被緩沖液，将抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/mL。在每個聚苯乙烯闆的反應孔中加0.1mL抗體，4℃過夜。次日，棄去孔内溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3min（以下簡稱洗滌）。

4.3.2 加樣

加一定稀釋的菌液0.1mL于上述已包被的反應孔中，置37℃孵育1h。然後洗滌（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

4.3.3 加酶标抗體

于各反應孔中加入新鮮稀釋的酶标抗體（經滴定後的稀釋度）0.1mL。37℃孵育0.5～1h，洗滌。

4.3.4 加底物液顯色

于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1mL，37℃孵育10～30min。

4.3.5 終止反應

于各反應孔中加入2mol/L硫酸0.05mL。

4.3.6 結果判定

可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔内顔色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顔色的深淺，以“＋”“－”号表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm處，以空白對照孔調零後測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍即為陽性。

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