膠原蛋白質檢-tft每日頭條

膠原蛋白質檢

生活更新时间:2025-02-07 08:00:17

一、簡介

我司基于标準文件，标準号：GB/T 38482-2021，提供動物源性 I 型膠原蛋白成分測定聚丙烯酰胺凝膠電泳法實驗，以确定膠原蛋白純度。

二、實驗原理

利用1型膠原蛋白具有其他蛋白質所沒有的三股螺旋結構，配合特異性的膠原酶作用，通過考馬斯亮藍對牛血清白蛋白(BSA)染色極限的确定，利用 SDS-PAGE 法測定1型膠原蛋白的成分。

三、實驗步驟

3.1 考馬斯亮藍對 BSA 的染色極限分析

取各濃度 BSA 溶液 20 µL 上樣。按照《中華人民共和國藥典》(2015 年版）0541 電泳法第四法規定的方法進行SDS-PAGE電泳，電泳結束後用凝膠成像系統對脫色後的膠片進行分析，确定考馬斯亮藍對 BSA 的染色極限。3.2 樣品中I型膠原蛋白成分測定樣品 a:用 3%的乙酸溶解樣品，使樣品質鹽濃度為 1 mg/mL。樣品 b:用膠原酶溶液溶解樣品，配制成樣品質量濃度和樣品 a 相同，于 37℃水浴中加熱 4 h。樣品 C: 取超純水加膠原酶溶液，使膠原酶的質暈濃度與樣品b的質量濃度相同。上樣分析：将上述樣品與 2X的樣品緩沖液等體積混合後，置于 100℃水浴中 1 min-2 min, 取出。

進行 SDS-PAGE 電泳。待測樣品、BSA (取染色極限量）和分子量标準品上樣體積均為 20 ul電泳電壓110 V。電泳結束後用凝膠成像系統對脫色後的膠片進行分析，記錄條帶光密度。

四、實驗結果計算計算公式：X =A- （B-C)x—待測樣品中 I 型膠原蛋白成分含量，％；A—樣品a中所有條帶光密度之和，％；B一樣品b中所有條帶光密度之和，％；c—樣品c中所有條帶光密度之和，％。五、示例電泳圖

膠原蛋白質檢（膠原蛋白純度檢測服務）1

P1、SDS-PAGE電泳圖

膠原蛋白質檢（膠原蛋白純度檢測服務）2

P2、SDS-PAGE電泳圖灰度計算

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