酶聯免疫吸附法(ELISA)由于其易于操作，可以簡單地回答樣本中有多少蛋白質、多肽、抗體這一基本問題，是實驗室比較常用的一種檢測方法。

而這種簡單的分析方法的核心，就是标準曲線。沒有它，我們的實驗就變成了一個二元的“是/不是”測試。有了它，我們可以深入研究生物反應的細節。

有多少人對ELISA标準曲線拟合頭痛？！實際上，不隻是ELISA标準曲線拟合，其它各種有關的實驗數據分析，都可以應用ELISA Calc進行數據分析。下面就跟随小編，看看怎麼四步輕松搞定 ELISA标準曲線制作與數據計算！

第 一 步

在Excel表格中輸入濃度和OD值

第 二 步

粘貼”數字部分貼入ELISA Calc

第 三 步

選擇回歸/拟合模型

拟合方式介紹：直線回歸（常用）、二次曲線回歸（常用）、三次曲線回歸、Logit-log直線回歸、Logistic曲線拟合1、Logistic(四參數)（常用）、Logistic(五參數)、Hill曲線拟合、指數曲線拟合、三次樣條插值

是否扣本底？是否取對數？

1.很多 Kit 可以同時用多種方式進行拟合；

2.除了試劑盒推薦的拟合方式，其他的拟合方式也可以嘗試；

3.雙抗夾心法可以選擇直線，二次，四參數三種；可以直接拟合，也可以采用扣除 O 孔本底後取對數的方式；

4.取單數可以采用單對數，或者雙對數法都可以；單對數就是 X 值（濃度值取對數）；

5.Logit-log的拟合方法是用于競争法的；競争法也可以用四參數或者五參數的方式進行拟合。

點擊“回歸/拟合”

拟合結果判斷：

先采用線性拟合，因為 OD值超過 2.0 後，用線性不好。可以點擊“數據輸入”改用：二次曲線法或者四參數；或者扣本底的直線回歸，二次曲線法或者四參數；

扣本底的做法：

扣本底，對數的選擇方式

點擊“回歸方程”可以複制後粘貼到其他的文件中。

方程拟合的好壞，還可以查看方程來檢驗，主要看r^2的值，越接近1，拟合效果越好。

第 四 步

由 Y 計算 Ｘ

1、從Excel表粘貼樣品反應值數據，點擊“粘貼”；

2、點擊“計算”；

3、得到數據；

4、點擊“複制”，然後可以粘貼到Excel中，得到計算後的數據

需注意的問題

1、二次曲線計算的結果會有兩個解，要舍掉其中一個偏離度大的。

2、Log-logit的拟合方法是用于競争法的，競争法也可以用四參數或五參數的方式進行拟合。

3、樣品的濃度等指标是根據标準曲線計算出來的，所以首先要把做标準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則後面的實驗結果無從談起。

4、設置标準曲線樣品的标準濃度範圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在标準曲線濃度範圍之内，包括上限和下限。而對于呈S型的标準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的範圍内。

5、最好采用倍比稀釋法配制标準曲線中的标準樣品濃度，ELISA試劑盒這樣就能夠保證标準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

6、檢測标準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準确性。

7、标準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。

8、做出的标準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。

要想繪制出合格的标準曲線、使用好标準曲線，真心不易，必須将各個方面的條件都考慮進去，即對标準曲線的繪制也實行質量控制，隻有這樣, 才能得出理想的标準曲線。

文章來源于江萊生物（shjianglai666）

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