1、利用基因重組的技術進行基因敲除,根據目的基因序列設計合成出同源基因片段,利用基因打靶技術将攜帶同源基因片段的基因打靶載體,用電穿孔的技術導入同源的胚胎幹細胞中,利用同源基因片段取代靶基因,達到基因敲除的目的。
2、篩選出基因打靶成功的細胞,用選擇性培養基篩選出基因打靶成功的細胞。
3、将打靶成功的細胞導入小鼠體内,觀察表形。将打靶成功的細胞導入小鼠囊胚中,再将囊胚導入假孕小鼠體内,發育成為基因敲除的小鼠,觀察目的基因改變後的小鼠的生物學性狀改變,達到驗證目的基因功能的目的。
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