通型生物顯微鏡的放大倍數可達幾百倍,一般真菌和酵母菌等微生物個體較大,用低倍物鏡和高倍物鏡即可得到良好的效果。但要看到經染色的細菌的形态和真核生物細胞的形态構造,最好使用油鏡頭。
油鏡比幹燥系高倍物鏡的工作距離短得多,最短的隻有0.1mm,且調焦程序又不同于幹燥系物鏡,操作時須特别細心,防止油鏡壓碎标本或損壞油鏡。
由于細菌體積微小,故在細菌的形态學研究中,經常需要借助顯微鏡油鏡,才能比較清楚地進行觀察,因此,必須熟練地掌握油鏡的使用及保護法。
(一)油鏡頭的識别:
各接物鏡的放大率可由其外形辨認,鏡頭長度越大,鏡片直徑越小,放大倍數大;反之,放大倍數小,油鏡頭長度大于低、高倍鏡,鏡頭下緣一般刻有一圈黑線或白線,并刻有100×、1.25或oil等字樣。
(二)油鏡的使用法:
1、使用顯微鏡油鏡時,必須将顯微鏡端正直立桌上,不得将鏡臂彎曲,使載物台傾斜,以免香柏油流溢,影響觀察,污染台面。
2、調焦距:
A、轉動粗調節器使載物台徐徐上升(或使鏡筒漸漸下降),直至油鏡頭浸沒至油中。此時眼睛應從側面觀察,以免壓碎标本片和損壞鏡頭。
B、将标本片放載物台上,用标本推進器固定,将欲檢部分移至接物鏡下,先用低倍鏡找出标本的位置,然後提高鏡筒,在标本的待檢部位滴鏡油一滴,再換油鏡觀察。
C、然後雙眼移至接目鏡,一面從接目鏡觀察,一面反方向緩慢地轉動粗調節器(下降載物台,或上升鏡筒)﹐當出現模糊物象時,換用細調節器,轉動至物象清晰為止。
D、觀察完畢,應先提高鏡筒,并将油鏡頭扭向一側,再取下标本片。油鏡頭使用後,應立即用擦鏡紙擦淨鏡頭上的油,若鏡油粘稠幹結于鏡頭上,可用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦拭鏡頭,并随即用幹的鏡紙擦去殘存的二甲苯,以免二甲苯滲入,溶解用以粘固透鏡的膠質物,造成鏡片移位或脫落。
3、對光:
采用天然光為光源時,宜用平面反光鏡;若用人工燈光時,則用凹面鏡,首先打開光圈,轉動反光鏡,使光線集中于集光器,可根據需要上下移動集光器和縮放光圈,以獲得最佳光度。
一般用低倍鏡或高倍鏡觀察物象或用油鏡檢查不染色标本時,需下降集光器并适當地縮小光圈,使光度減弱;若用油鏡檢查染色标本時,光度宜強,應将顯微鏡亮度開關調至最亮,光圈完全打開,集光器上升至與載物台相平。
先在幹燥系高倍物鏡下找準被檢物﹐并置于視野中央,然後升高鏡筒約1.5cm,再把油鏡頭旋轉至對準正下方,在玻片标本的鏡檢部位滴一滴浸液(鏡頭油),将頭偏于一側觀察,下降鏡筒,到物鏡的前透鏡與浸液接觸時停止,繼而從目鏡裡細心觀察視野,旋轉粗準焦螺旋,使鏡筒緩慢地上升,剛出現不太清晰的物象時就換用細準焦螺旋,至物象清晰後進行觀察。
初次使用油鏡,也可按照幹燥系物鏡的調焦程序調節焦距。即先下降鏡筒至物鏡最接近蓋玻片,但絕不能壓在标本上,再上升物鏡調焦。但此法有将浸液擠出去和造成空泡的缺點。若上調粗準焦螺旋時,鏡筒已升到油浸鏡頭離開油滴,仍不能發現被檢目的物,須重新調節。
油鏡使用完畢,提升鏡筒約2cm,把油鏡轉離光軸,先用擦鏡紙擦去鏡頭上的大部分油,再用浸少量二甲苯的擦鏡紙擦去鏡頭上的殘餘油迹,最後用幹擦鏡紙擦去鏡頭上的二甲苯。擦拭時要順鏡頭的直徑方向,不要沿鏡頭的圓周方向擦,玻片标本上的油也要進行清潔,即把一小張擦鏡紙蓋在載玻片油滴上,在紙上滴一些二甲苯,趁濕把紙往外拉,這樣連續作三四次即可幹淨(如果是使用石蠟油,清潔時隻用擦鏡紙不必滴二甲苯)。
油鏡使用的鏡頭油為香柏油或石蠟油,因香柏油黏稠度較高,使用之後擦拭較麻煩,因而許多人采用石蠟油代替使用,滴浸液時,要盡量避免氣泡的形成,如果形成了氣泡,可用解剖針尖将氣泡排在一邊,以免影響觀察。
由于細菌體積微小,故在細菌的形态學研究中,經常需要借助顯微鏡油鏡,才能比較清楚地進行觀察。因此,同學們必須熟練地掌握油鏡的使用及保護法。
油鏡的使用原理:
油鏡的透鏡很小,光線通過玻片與油鏡頭之間的空氣時,因介質密度不同,發生折射或全反射,使射入透鏡的光線減少,物象顯現不清;若在油鏡與載玻片之間加入和玻璃折射率 (n=1.52)相近的香柏油(n=1.515),則使進入透鏡的光線增多,視野亮度增強,使物象明亮清晰。
Cargille公司的浸油是唯一滿足美國FDA标準的浸油産品,所有的Cargille浸油産品均滿足DIN 58884标準要求。
第一款非幹性浸鏡油就是首先由Cargille實驗室發明并且在1940年對外宣布。從此,Cargille就一直保持着該領域的龍頭地位,引進第一款高粘性、低熒光性的浸鏡油,完全公開的光學和 物理特性,專注于折射指數的技術服務,一流的研發實驗室。人們經常忽視的非幹性浸鏡油的真正的優勢是即使将其暴露在空氣中也不會變質。
以下是多種型号浸鏡油的應用指南
用于普通光學顯微鏡 :A型和B型幾乎可以互換,彼此互溶的中級粘度。與其他類型相比,生産數量較多,并且A型和B型是最經濟的。在他們之間做出選擇的決定因素是您的特定應用的最佳粘度。
A型(低粘滞度):150cSt,減少積聚空氣的傾向,對初學者特别有用。氣泡會導緻圖像質量下降。
B型(高粘滞度):1250cSt,足夠厚,可以用一種應用查看多張載玻片。這樣可以節省批處理時間。
用于自動血液系統:使用300型,自動血液系統依賴于浸油的精确,精确控制的物理和光學特性,以便成功進行成像和機械加工。300型的設計和制造符合該設備的嚴格要求,包括專業的粘度和嚴格的控制,以保持其一緻性。
用于倒置,傾斜,投影,和長焦距的儀器:使用NVH型或OVH型;蓋玻片與物鏡之間或載玻片與聚光鏡之間的間隙越大,就越需要高粘度。NVH型21,000 cSt和OVH型46,000 cSt的極高粘度為這些應用提供了極好的結果。
NVH型
OVH型
混合油的可混溶組:可混溶的浸油組是A,B,300,NVH和OVH。用戶可以輕松混合來自Miscible Group的任何兩種浸油,以獲得具有中等粘度的浸油,同時保持兩者共有的光學性質。
用于熒光顯微鏡:LDF型和HF型可實現極低的熒光。FF型雖然不符合ISO标準,但實際上不含熒光。HF型比LDF型熒光稍強,但不含鹵素。對于大多數非關鍵熒光顯微鏡應用,類型A和B的熒光強度很低。LDF,HF和FF型的粘度分别為500 cSt,700 cSt和170 cSt。類型A和B為150 cSt和1250 cSt。
LDF型
HF型
用于高溫(> 23℃至37℃):使用37型。溫度升高可能是由于台下照明器,“高溫”或其他原因–是Cargille浸入油37型的理想情況。專為在人體上工作而開發體溫,37型在37°C下的折射率為1.515,粘度為1250 cSt。解決了超過标準校準溫度23°C時圖像質量下降的問題。用戶可以根據自己的工作溫度進行混合;将B型在23℃時粘度為1250cSt與37型在37°C時粘度為1250 cSt共混,保持恒定的1250 cSt粘度和光學值,并将校準溫度按比例放置在23°C至37°C之間。
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