在度過了一個漫長的假期後，終于盼來了開學。假期充值一時爽，一直充值......那些凝結着我們心血的實驗樣本可就不爽了！本以為休息十天半個月就能回來提取，因此并沒有按照長期保存的标準對樣本進行保存，你的核酸樣本可還好？開學季到來，各種擔心也接踵而來，回到實驗室之後重新對樣本進行采集和保存也成為了當務之急。那我們應該如何對核酸提取的樣本進行正确的采集和保存呢？接下來，小V就跟大家一一道來。

用于核酸提取的生物樣本采集原則

随着核酸檢測技術的發展，對待測生物樣本的質量要求也越來越高。作為核酸提取的重要組成部分：樣本采集與保存的正規化，也成為核酸質量把控的關鍵環節。

在樣本采集時往往會受到很為潛在影響因素的影響，且這些因素大多難以控制，所以在樣本采集時我們需要滿足以下兩點基本原則。

❖ 新鮮原則：新鮮狀态下的樣本所受到的内源性核酸酶的影響相對最小，因此提取出的核酸質量相對更好。

❖ 适量原則：樣本投入量過多容易導緻樣本裂解不充分，并引入過多雜質導緻所提取的核酸純度受到影響；而樣本投入量過少，則會導緻提取的核酸濃度過低。

注意：需要對生物樣本進行編号記錄，同時編号需遵循簡單性，唯一性，穩定性原則。

常見類型核酸提取樣本采集與保存方法

不同類型的樣本由于其自身特點不同，所以在采集和保存的方法上也會有所差異。所謂“因材施教“，樣本采集和保存也是如此，接下來我們就來看看常見的一些樣本類型應該如何操作？在這個過程中又有哪些容易忽略的小細節呢？

1、動物組織樣本

建議采集流程

（1）準确切除所需組織後應立即剔除結締組織和脂肪組織；

（2）在RNase-free的生理鹽水中迅速漂洗樣本以去除血漬和污物；

（3）轉入用油性記号筆标記的鋁箔或凍存管中。

建議保存方法

若樣本30 min内不進行核酸提取則需立即進行液氮冷凍，在-20℃下短期保持（如：小鼠肌肉組織3個月左右開始出現降解）；放入液氮或轉入-80℃超低溫冰箱中長期保存；該操作過程最好在冰上進行，并且避免後期反複凍融。

2、植物組織樣本

建議采集流程

（1） 盡量采集體态正常的新鮮樣本放入樣本袋中做好标記；

（2） 樣本若有泥土一般需要洗滌，之後對其進行幹燥并盡快進行核酸提取，若在偏遠地區野外可考慮鹽幹燥[2]。

Tip：植物樣本采集要保證樣本有充分的代表性和典型性，而且采樣時間和部位要統一；對于含有多糖多酚等次生代謝産物的衰老葉片可在4℃黑暗環境下饑餓1-2天。

建議保存方法

若不立即進行核酸提取，短時間内可進行低溫保存，若保存時間較久需液氮冷凍後轉入超低溫冰箱中保存。

3、血液樣本

全血建議采集方法

一般使用抗凝采血管(不推薦肝素抗凝管)從外周靜脈采集，若進行低溫冷藏，需要完整血細胞，則需加入二甲基亞砜[3]。

建議保存方法

放置4℃條件下不得超過7天，若需長時間保存需液氮凍存後轉移至-80℃冰箱。

血清、血凝塊建議采集方法

建議使用橘黃色促凝采血管采集全血，待血液完全凝固後，1000 g離心10 min，分離血清，下層即為血凝塊。該過程需要在采集後1小時内處理好，超過了這個時間，細胞活性會迅速下降，導緻細胞結構脆弱，核酸降解。

建議保存方法

标本短期（15天）可在-20℃下保存，較長期保存應在-80℃下。

血漿建議采集方法

血漿是全血經抗凝處理後通過離心沉澱得到的不含細胞成分的液體。

建議保存方法

若不立即提取須放入-20℃ 或低于-20℃下進行保存。

單個核細胞建議采集方法

可以從抗凝全血制備，使用淋巴細胞分離液分離或者使用紅細胞裂解液裂解全血中的紅細胞，洗滌得到單個核細胞。

建議保存方法

如果不提取核酸，可保存于-80℃。

4、細胞樣本

建議采集方法

采集細胞樣本的容器應無菌、幹燥、潔淨具有防漏瓶蓋，及時吸出培養皿中的培養液，将細胞培養至對數生長期後再進行核酸提取。

建議保存方法

将離心得到的細胞沉澱放入液氮凍存後于-80℃低溫條件下保存。

5、液體樣本

建議采集方法

體液包括胸水，腹水，腦脊液，尿液等可按水樣标本的方式離心取沉澱後提取核酸。

建議保存方法

将離心後沉澱保存至-80℃冰箱。

6、糞便

建議采集方法

可借助糞便收集盒及糞便采集管進行采集，黃豆粒大小樣本即可。

建議保存方法

4h内進行核酸提取或-80℃低溫保存。

開學日在即，小夥伴們回到實驗室後不妨先根據文中的樣本保存條件周期對樣本做個大緻判斷，之後抽樣進行核酸提取，通過跑膠等方法判斷核酸的完整情況，确保樣本無恙，再開展實驗研究。諾唯贊為您提供多款核酸提取産品，省時省力又省心！

參考資料：

[1] Watermann C, Valerius KP, Wagner S, et al. Step-by-step protocol to perfuse and dissect the mouse parotid gland and isolation of high-quality RNA from murine and human parotid tissue. Biotechniques. 2016;60(4):200–203. Published 2016 Apr 1. doi:10.2144/000114404

[2] Carrió E, Rosselló JA. Salt drying: a low-cost, simple and efficient method for storing plants in the field and preserving biological repositories for DNA diversity research. Mol Ecol Resour. 2014;14(2):344–351. doi:10.1111/1755-0998.12170

[3] Gautam A, Donohue D, Hoke A, et al. Investigating gene expression profiles of whole blood and peripheral blood mononuclear cells using multiple collection and processing methods. PLoS One. 2019;14(12):e0225137. Published 2019 Dec 6. doi:10.1371/journal.pone.0225137

[4] Bulla A, De Witt B, Ammerlaan W, Betsou F, Lescuyer P. Blood DNA Yield but Not Integrity or Methylation Is Impacted After Long-Term Storage. Biopreserv Biobank. 2016;14(1):29–38. doi:10.1089/bio.2015.0045

[5] Laktionov PP, Tamkovich SN, Rykova EY, et al. Cell-surface-bound nucleic acids: Free and cell-surface-bound nucleic acids in blood of healthy donors and breast cancer patients. Ann N Y Acad Sci. 2004;1022:221–227. doi:10.1196/annals.1318.034

更多精彩资讯请关注tft每日頭條，我们将持续为您更新最新资讯!