土壤中氮的來源一般有以下幾方面：施入土壤中的化學氮肥和有機肥料、動植物殘體的歸還、生物固氮、雷電降雨帶來的等等，目前，施入土壤中的肥料是土壤氮的主要來源。今天栢晖生物給大家整理了如何通過堿解擴散法測定土壤水解性氮：

一、試劑

(1)1.0mol/L氫氧化鈉溶液：稱取化學純氫氧化鈉40 g，用蒸餾水溶解後冷卻定容到1000 ml。

(2)1.2mol/L氫氧化鈉溶液：稱取化學純氫氧化鈉48 g,用蒸餾水溶解定容到1000 ml。

(3)1.8mol/L氫氧化鈉溶液：稱取化學純氫氧化鈉72 g，用蒸餾水溶解後冷卻定容到1000 ml。

(4)2%硼酸溶液：稱取20 g硼酸，用熱蒸餾水(約60℃)溶解，冷卻後稀釋至1000ml，用稀鹽酸或稀氫氧化鈉調節pH至4.5(定氮混合指示劑顯葡萄酒紅色)。

(5)0.005mol/L（1/2 H2SO4）硫酸标準溶液：量取H2SO4 2.83 mL，加蒸餾水稀釋至5000 mL，然後用标準堿或硼酸标定之，此為0.0200mol/L（1/2 H2SO4）标準溶液，再将此标準溶液準确的稀釋4倍，即得0.0050mol/L（1/2 H2SO4）的标準液。

(6)定氮混合指示劑：0.5g溴甲酚綠和0.1g甲基紅溶于100ml乙醇中。

(7)特制膠水：阿拉伯膠(稱取40g粉狀阿拉伯膠，溶于50 ml蒸餾水中)在燒杯中熱溫至70—80℃，攪拌促溶，約1小時後放冷。加入甘油20 mL，飽和碳酸鉀水溶液20 mL，攪拌、放冷。離心去除泡沫和不溶物，清液貯于具塞玻璃瓶中備用。(最好放置在盛有濃硫酸的幹燥器中以除去氨)

(8)硫酸亞鐵(粉狀) ：将分析純硫酸亞鐵磨細保存于陰涼幹燥處。

二、主要儀器

擴散皿、微量滴定管、1/1000分析天平、恒溫箱、玻璃棒、毛玻璃、皮筋、吸管(2 ml和10 ml)，臘光紙、角匙、瓷盤。

三、試樣的制備

稱取通過18号篩(孔徑1 mm)風幹樣品2.000 g(精确到0.001g)和1 g硫酸亞鐵粉劑，均勻鋪在擴散皿外室内，水平地輕輕旋轉擴散皿，使樣品鋪平。(水稻土樣品則不必加硫酸亞鐵。)

四、分析步驟

1. 用吸管吸取2%硼酸溶液2 ml，加入擴散皿内室，并滴加1滴定氮混合指示劑，然後在皿的外室邊緣塗上特制膠水，蓋上毛玻璃，并旋轉數次，以便毛玻璃與皿邊完全粘合，再慢慢轉開毛玻璃的一邊，使擴散皿露出一條狹縫，迅速用移液管加入10 ml 1.8 mol/L氫氧化鈉于皿的外室(水稻土樣品則加入10 ml 1.2 mol/L氫氧化鈉)，立即用毛玻璃蓋嚴。

2. 水平輕輕旋轉擴散皿，使堿溶液與土壤充分混合均勻，用橡皮筋固定，貼上标簽，随後放入40℃恒溫箱中。24小時後取出，再以0.01 mol/L HCl标準溶液用微量滴定管滴定内室所吸收的氮量，溶液由藍色滴至微紅色為終點，記下鹽酸用量毫升數V。同時要做空白試驗，滴定所用鹽酸量為V0。

五、結果計算

式中：

C—0.005mol/L（1/2 H2SO4）标準硫酸的摩爾濃度；

V—滴定樣品時所用去的鹽酸的毫升數；

b—空白試驗所消耗的标準鹽酸的毫升數；

m—初始樣品重；

14—氮原子的摩爾質量mg/mol；

1000—換算成每百g樣品中氮的mg數。

來源：成都栢晖生物整理

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