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培養基的配制方法

科技更新时间:2024-12-01 12:52:16

　　1、配制用水

　　培養基的大部分是水，所以水的質量直接影響培養基的質量。按Waymouth标準，水的電阻應為200萬歐姆，一般實驗室裡以玻璃蒸餾器制備的

　　雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

　　2、培養基

　　培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠低于6.8，則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。

　　3、血清

　　培養中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分複雜、條件不易控制，可選用無血清培養基。

　　4、抗菌素

　　為防止培養時期細菌的污染，可在培養基中添加适當抗菌素，一般用量與組織細胞培養相同：卡那黴素100單位/毫升，或雙抗--青黴素100單位/毫升，鍊黴素100微克/毫升。

　　5、植物血凝素（PHA）

　　非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。

　　經實驗測定其分裂高峰分别于培養後44-48小時和68-72小時。

　　PHA有粘多糖，蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質起凝集作用。PHA激活的細胞數随其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均

　　被激活為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。

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