高效液相色譜法根據分離機制的不同分為：液-固吸附色譜法、液液分配色譜法、化學鍵合相色譜法、離子交換色譜法、凝膠色譜法和液相制備色譜法

液-固吸附色譜法

1、分離原理 液-固吸附色譜的固定相為固體吸附劑，它的分離原理是基于吸附劑表面對不同物質吸附能力不同使混合物得到分離的。

當流動相經過色譜柱時，吸附劑表面的活性中心就要吸附溶劑分子，而當流動相攜帶着樣品進入柱子時，樣品分子就要取代吸附劑表面上的溶劑分子，從而在吸附劑表面上發生競争吸附——樣品分子與溶劑分子的競争，以及樣品中帶有官能團的各種組分分子間的競争。各組分分子對吸附劑表面活性中心的競争能力的大小，決定了它們的保留情況，被吸附劑吸附的越牢的組分，越不易被流動相洗脫下來，保留時間越長；反之，保留時間越短。這樣，混合物中的各組分便得到了分離。

2、固定相 液-固色譜法所用的固定相分為極性和非極性兩大類，極性吸附劑有矽膠、氧化鋁、氧化鎂等，非極性吸附劑有活性炭。極性吸附劑又分為酸性和堿性，酸性的吸附劑優先吸附堿性物質（如胺類），堿性吸附劑優先吸附酸性物質（如吡咯衍生物）。

矽膠是液-固色譜法中較常用的固定相吸附劑，其與大多數樣品不起反應，最大允許樣品量大，柱效高，有多種型号的矽膠供使用。樣品的分離主要決定于矽膠上活性中心與溶質分子間的相互作用力的大小，由于矽膠吸附劑極性較強，并且表面呈酸性，極性樣品分子和堿性物質優先被吸附。

3、流動相 液-固色譜中流動相選擇的原則是：極性大的試樣選擇極性大的流動相，極性小的試樣選擇極性低的流動相。液固色譜中使用的流動相主要是非極性的烴類，并且在其中加入少量的極性溶劑做緩和劑，極性越大的組分保留時間越長。液固色譜法适于分離具有不同基團或不同基團數目的化合物和異構體，而不适合分離同系物。液固色譜不适合強極性的或離子型的樣品的分離，不适用與分離同系物（因為它對相對分子質量的選擇性較小）。

液-液分配色譜法

1、分離原理 液液分配色譜法的固定相和流動相都是液體。一個液相作為流動相，另一個液相則分散在細顆粒的惰性擔體上做固定相，兩種液相相互共存但互不相溶。當帶有待測試樣的流動相進入色譜柱時，溶質分子溶解到兩種液相中并很快達到分配平衡，由于試樣中各組分在兩液相中分配系數的不同而達到分離。

2、固定相 液液分配色譜常用的固定液有聚乙二醇、角鲨烷、聚酰胺、正十八烷和異三十烷等，可采用塗漬的方法分布在擔體上。固定液對各組分應有不同的溶解度，但應不溶于流動相中。在液固色譜中所用的吸附劑都可用作載體，常用的載體有全多孔型載體和表面多孔型載體

3、流動相 液液分配色譜所用的固定相和流動相極性差别很大。為使流出組分的k在1~10之間，應選擇合适的溶劑強度。

化學鍵合相色譜法

1、化學鍵合相色譜 化學鍵合相色譜是采用化學鍵合固定相的色譜。化學鍵合固定相就是利用化學反應的方法将固定液鍵合到載體表面上。化學鍵合相色譜在高效液相色譜的整個應用中占80%以上，是近代液相色譜中最重要的色譜法。

2、反向鍵合相色譜 反向鍵合相色譜采用的是非極性鍵合固定相。非極性固定相是将全孔微粒矽膠載體，經酸化處理，主要是各種烴基矽烷鍵合相的苯基團。

3、正相鍵合相色譜

4、離子對和離子抑制色譜。

離子交換色譜法

在離子交換色譜中，固定相是離子交換樹脂，流動相常是水溶液，用于離子型和可離解樣品的分離。它是利用待測樣品中各組分離子與離子交換樹脂的親和力的不同而進行分離的。

凝膠色譜法

凝膠色譜法又叫空間排阻色譜法，它與其他色譜法的分離機制不同，近似于分子篩選效應，固定相和樣品分子間沒有吸附或溶解作用。凝膠色譜法的固定相為多孔性凝膠類物質，流動相為水溶液或有機溶劑，它是根據不同組分分子體積的大小進行分離的。

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