dna及rna分子的提取?本方案(Chomczynski1993) 可以從部分組織或細胞中同時提取RNA 、DNA 和蛋白質像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一樣，此方法涉及用異硫氰酸胍和苯酚的單相溶液裂解細胞加入氯仿産生第二（有機）相，從而DNA 和蛋白質被抽提，而RNA留在水相上清中有機相中DNA 和蛋白質的分離，通過按順序用乙醇、異丙醇進行沉澱從有機相中回收的DNA 是20kb 大小、适合進行PCR 反應的模闆蛋白質由于暴露在胍中，而變性則主要用于免疫反應用異丙醇從水相中沉澱出的RNA 可通過色譜法在寡核苷酸-纖維素柱進一步純化和/或用于Northern 雜交、反轉錄或RT-PCR ，接下來我們就來聊聊關于dna及rna分子的提取?以下内容大家不妨參考一二希望能幫到您!

dna及rna分子的提取

本方案(Chomczynski1993) 可以從部分組織或細胞中同時提取RNA 、DNA 和蛋白質。像它的前身(Chomczynski and Sacchi 1987) 一樣，此方法涉及用異硫氰酸胍和苯酚的單相溶液裂解細胞。加入氯仿産生第二（有機）相，從而DNA 和蛋白質被抽提，而RNA留在水相上清中。有機相中DNA 和蛋白質的分離，通過按順序用乙醇、異丙醇進行沉澱。從有機相中回收的DNA 是20kb 大小、适合進行PCR 反應的模闆。蛋白質由于暴露在胍中，而變性則主要用于免疫反應。用異丙醇從水相中沉澱出的RNA 可通過色譜法在寡核苷酸-纖維素柱進一步純化和/或用于Northern 雜交、反轉錄或RT-PCR 。

總RNA 的産率因組織或細胞來源而異，但一般而言，組織的初始産量為4~7μg/mg ,細胞為5 ~ 10 mg/107 個細胞，所提取的RNA 的A260/A280 比值為1.8 ~ 2.0 。

材料準備本方案中的所有試劑均需要用DEPC 處理的水。

試劑

細胞或組織

氯仿

DEPC 處理過的水

十五水擰檬酸二鈉( 0.8mol/U） 不需調整pH 。

乙醇（75%)

異丙醇

液氮

單相裂解試劑

氯化鈉( 1.2 mol/L)

磷酸鹽緩沖鹽水(PBS) ，冰冷（可選，見步驟1)僅适用于重懸和單層細胞生長所需的。

RNA 沉澱溶液

SDS (20%, m/V) （可選，見步驟7 )

設備

用于測量在260nm 處吸光度的比色皿

組織勻漿器

低中速離心機和轉子

DEPC 處理水清洗過的研缽和杵，預冷

聚丙烯帶封蓋的管

65°C 水浴（可選，見步驟7)

方法

1. 準備細胞或組織樣品提取RNA 。

對于組織樣品

處理含有豐富的蛋白質分解酵素的組織如胰腺或腸道時，最好将組織先切成小塊( 100mg ) ，然後直接放入液氮中。快速冷凍的組織可以被轉移到－70°C 保存或立即用于提取RNA 。組織可以存儲于－70°C 數月而不影響RNA的産量或完整性。

冷凍和粉碎并不是必需的。不含有豐富的RNase 的組織可以被迅速剁碎成小塊，并直接轉入加有适量溶液D （步驟l.iii ) 的聚丙烯snap-cap 管中。

i 分離出所需組織，并立即将它們放置在液氮中。

ii 将約100mg 的冷凍組織轉移到含有液氮的研缽中，并用杵粉碎。在粉碎過程中添加液氮以保持組織的冷凍狀态。

iii . 轉移粉狀組織至還有lmL 冰冷單相裂解試劑的聚丙烯snap-cap 管中。

iv 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15~30s 。

對于懸浮培養的哺乳動物細胞

i 通過200 ~ 1900g 離心5 ~ 10min 收獲細胞。

ii 棄培養基，用1 ~ 2mL 的無菌冰冷PBS 重懸細胞沉澱。

iii 通過離心收集細胞，棄去PBS, 按每106 個細胞加lmL 單相裂解試劑比例加入單相裂解試劑。

iv 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15 ~ 30s 。

對于單層哺乳動物細胞

i 棄去培養基，并用5~10mL 無菌冰冷的PBS 漂洗細胞一次。

ii 棄去PBS, 按一個90mm 培養皿加入lmL 單相裂解試劑比例加入單相裂解試劑裂解細胞（每60mm 培養皿0.7mL) 。

iii. 細胞裂解液轉移到聚丙烯snap-cap 管中。

iv . 在室溫下用Polytron 勻漿器勻漿組織15 ~ 30s 。

2.在室溫下孵育5min, 以完全分離核蛋白複合物。

3.每毫升單相裂解試劑添加0.2mL 氯仿。劇烈振動或渦旋以混合樣品。

4.4°C 以12000r/min 離心15min, 分離成兩相的混合物。将上層水相轉移到新的管中。

DNA 和蛋白質提取到有機相中， RNA 留在水相中。DNA 和蛋白質可能通過順序用乙醇、異丙醇沉澱，并從有機相中回收

5 . 從水相中沉澱的RNA : 對于每個初始毫升的單相裂解試劑，加入0.25 倍體積的異丙醇和0 .2 5 倍體積沉澱RNA 溶液。徹底混合後，室溫下放置10min 。

6.微型離心機4 °C 以最大的速度離心10min 收集沉澱出的RNA 。用75％乙醇洗滌沉澱兩次，再離心。用一次性吸頭清除殘留的乙醇。敞開放置數分鐘使乙醇揮發，不要讓沉澱完全幹燥。

7.加入50~100mL DEPC 處理過的水， -70℃ 儲存RNA 溶液。

加入0.5 % SDS, 然後加熱至65℃ 可協助溶解沉澱。

8.估計RNA 的濃度。

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