細粒棘球縧蟲終宿主?囊尾蚴是縧蟲的幼蟲,寄生在宿主的橫紋肌及結締組織中,呈包囊狀,故俗稱“囊蟲”在動物體内寄生的囊尾蚴有多種,通過肉制品傳播給人類的有豬囊尾蚴和牛囊尾蚴,其中以豬囊尾蚴更常見囊尾蚴病呈全球性分布,以發展中國家多見由于發展中國家衛生基礎設施不完善,囊尾蚴病在豬群和人群中發病率高,造成巨大的經濟損失近年來,由于移民與國際旅遊人數的增高,囊尾蚴病的發病率在工業化發達國家也有所增加1993年,WHO将豬囊尾蚴病列為需要根除的六大疾病之一,下面我們就來聊聊關于細粒棘球縧蟲終宿主?接下來我們就一起去了解一下吧!
囊尾蚴是縧蟲的幼蟲,寄生在宿主的橫紋肌及結締組織中,呈包囊狀,故俗稱“囊蟲”。在動物體内寄生的囊尾蚴有多種,通過肉制品傳播給人類的有豬囊尾蚴和牛囊尾蚴,其中以豬囊尾蚴更常見。囊尾蚴病呈全球性分布,以發展中國家多見。由于發展中國家衛生基礎設施不完善,囊尾蚴病在豬群和人群中發病率高,造成巨大的經濟損失。近年來,由于移民與國際旅遊人數的增高,囊尾蚴病的發病率在工業化發達國家也有所增加。1993年,WHO将豬囊尾蚴病列為需要根除的六大疾病之一。
1 病原學特征
囊尾蚴多寄生在舌肌、咬肌、臀肌、深腰肌和膈肌中。外觀呈橢圓形囊泡狀,大小為(6~10)mm×5mm,囊内充滿液體,囊壁是一層薄膜,壁上有一圓形粟粒大的乳白色内陷頭節,在頭節上有4個吸盤。有的囊尾蚴在頭節的頂端有頂突,在頂突最前端有許多角質小鈎,分兩圈排列。囊尾蚴由于外觀肉眼可見,乳白色,半透明,綠豆或黃豆大小,故稱為“米豬肉”或“豆豬肉”。
2 流行病學特征
豬囊尾蚴病主要是在豬與人之間傳播的一種人畜共患病,又稱為豬囊蟲病,該病的流行與人的生活習慣有很大關系。豬囊尾蚴對應的成蟲是豬帶縧蟲。人是唯一的終末宿主,所以豬囊尾蚴病的唯一感染來源是小腸内有豬帶縧蟲寄生的病人。豬是中間宿主,豬帶縧蟲病的感染來源是攜帶豬囊尾蚴的病豬。此外,人同時還可作為中間宿主感染豬囊尾蚴病。豬患囊尾蚴病主要原因是豬的散養或人的糞便管理不嚴等,造成豬吃到豬帶縧蟲病人糞便中的孕節或蟲卵,從而感染豬囊尾蚴病。人感染囊尾蚴病的原因主要有兩種:一種是經口感染。人食用被縧蟲卵污染的食物和水,如用人糞水澆菜,人食用未洗淨的沾有蟲卵的蔬菜而患病,或者患有豬帶縧蟲病的病人便後不洗手或沒有洗幹淨,誤食入污染在自己手上的蟲卵而感染了豬囊尾蚴病。另一種是自身感染。對于小腸内有豬帶縧蟲寄生的病人,在某些情況下,縧蟲脫落的節片逆行上胃,在消化液的作用下蟲卵的卵殼被消化,幼蟲移行到各組織器官,使人感染豬囊尾蚴病。
囊尾蚴呈全球性分布,但是主要流行于亞洲、非洲、拉丁美洲的一些國家和地區。在我國除東北、華北和西北地區及雲南和廣西部分地區常發外,其餘地區均為散發,長江以南地區較少,東北地區感染率較高。我國除浙江省外的省份都有帶縧蟲感染的病例報道。近年來,各地的感染人數呈增加的趨勢,感染率比1990年上升了52.47%,其中西藏、四川兩省份的感染率分别上升了97%和98%,牧民主要因生食牛肉而感染牛帶縧蟲病。豬帶縧蟲病以黑龍江感染率最高,牛帶縧蟲病則以西藏為首,個别地區感染率高達70%以上。
3 危害
囊尾蚴病既可以感染豬,又可以感染人。囊尾蚴病的人群感染率低,但豬感染率較高,在我國的各個省份均有發生和流行,呈散發狀況,個别地區呈地方性流行,其中東北、華北、西南地區是最主要的流行區。豬囊尾蚴病對豬的危害主要是妨礙豬的生長和發育,特别是影響幼齡豬的生長。輕症的豬囊尾蚴病在臨床上不易察覺,隻有當豬在嚴重感染時才呈現症狀,如豬的肌肉僵硬,肩部肌肉水腫,兩肩增寬,臀部隆起,顯得異常肥胖,而身體中部窄細,呈獅狀體或啞鈴狀。如果囊尾蚴寄生在舌部,則咀嚼、吞咽困難;寄生在咽喉,則聲音嘶啞:寄生在眼球,則視力模糊;寄生在大腦,則出現痙攣,或因急性腦炎而突然死亡。該病不僅嚴重地影響着養豬業的發展,給養豬業造成巨大的經濟損失,而且還威脅着人類的身體健康。人囊尾蚴病一方面可以使人感染豬帶縧蟲的概率大大提高,豬帶縧蟲在小腸内寄生,導緻病人出現貧血、消瘦、腹痛、消化不良、腹瀉等症狀;另一方面,囊尾蚴寄生在人體各組織器官中對人體造成危害,其危害程度與其寄生數量和寄生部位有關。囊尾蚴寄生在人體肌肉中可出現酸痛、僵硬;寄生于腦内可出現神經症狀,抽搐、癫痫、癱瘓甚至死亡;壓迫眼球可出現視力下降,甚至失明。其中腦囊尾蚴病危害最嚴重,是發展中國家繼發性癫痫最常見的病因。全世界腦囊尾蚴病患者約有5000萬,其中80%以上生活在低收入和中低收入國家,每年有5萬多人死于該病。
豬囊尾蚴病和人豬帶縧蟲病是在豬和人之間形成一種互為因果、循環感染的寄生蟲病,若衛生環境防治措施松懈,就會導緻惡性循環。豬帶縧蟲病的患者每天向外界排除孕節和蟲卵,而且可持續數年甚至20餘年,這樣豬就長期處于威脅之中。人是豬囊尾蚴的唯一終末宿主,感染豬帶縧蟲主要取決于飲食衛生習慣和烹饪與食肉的方法。人吃了帶有活囊尾蚴的豬肉或被污染的食物而感染豬帶縧蟲病。流行區的居民喜食生的或未熟的豬肉、牛肉,對縧蟲病的傳播起着決定性的作用。人囊尾蚴病是由于人吃了被豬帶縧蟲卵污染的食物或豬帶縧蟲病患者自體感染所緻,豬帶縧蟲病人有16%~25%同時并發囊尾蚴病。故囊尾蚴病是嚴重危害人體的寄生蟲病之一。
4 國内外衛生要求
根據《畜禽屠宰衛生檢疫規範》(NY467—2001),屠宰生豬囊尾蚴的主要檢驗部位為咬肌、深腰肌和膈肌,其他可檢部位為心肌、肩胛外側肌和股部内側肌等。按國家标準GB16548—2006的有關規定,“發現囊尾蚴和鈣化蟲體者,全屍作工業用或銷毀。”
5 檢測方法
5.1 病原學檢測
5.1.1 活畜檢測
豬囊尾蚴的活體檢查部位主要是舌肌和眼外肌。用特制的開口器或木棒等工具撬開豬嘴,一手墊一塊粗布将舌頭拉出仔細觀察,并用手觸摸舌底、舌側、舌根部有無囊結,觸摸時感覺有帶彈性的豆大結節即為囊結,其檢出率為30%左右。檢查眼外肌時,用拇指與食指捏住眼結膜及眼外皮,感覺有突起物時可初步判斷為囊結。
5.1.2 屠宰後肉品檢測
豬宰後檢驗時,按照«肉品衛生檢驗試行規程»要求,切開咬肌、舌肌、心肌、深腰肌等處,可見到豆粒或米粒大小囊泡,橢圓形,白色透明,囊内含半透明狀液體和米粒大的白色頭節。挑取皮下結節,剝去外層纖維被膜,将蟲體直接在鏡下觀察,囊壁分兩層,外為皮層,内為間質層,間質層有一處向囊内增厚形成向内翻卷收縮的頭節,其構造與成蟲的頭節相似。必要時做壓片、固定、脫水、透明、染色後鑒定。
5.2 皮内變态反應
取新鮮豬肉中囊尾蚴頭節研制成1∶100懸液。注入待檢豬耳朵外皺褶部分皮内0.1~0.2mL,5min後開始出現反應。判斷:注射處發生紅腫,直徑在11mm以上,45min後開始消退,為陽性反應;無上述反應或反應不顯著者為陰性。
5.3 血清學檢測
囊尾蚴病原學診斷過程比較複雜,獲得準确的診斷結果存在困難,易出現漏檢的情況,因此血清學及免疫學檢查方法常用于輔助囊尾蚴的診斷和鑒定。實驗室診斷豬囊尾蚴病的方法主要有:補體結合反應、沉澱反應、間接紅細胞凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗等。補體結合反應很早就被用于囊尾蚴病診斷,但由于假陽性率太高而逐步被别的方法所取代。沉澱反應包括液相沉澱反應和固相沉澱反應,用該方法對囊尾蚴病進行診斷存在檢出率太低的缺點。目前常用的檢測方法為間接紅細胞凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗。
5.3.1 間接紅細胞凝集試驗
間接紅細胞凝集試驗(IHAT)是以紅細胞作免疫配體的載體,并以紅細胞凝集讀數的血清學方法。最常用的紅細胞為綿羊紅細胞或人(O型)紅細胞,來源方便。目前均用醛化紅細胞,其可保存半年而不失免疫吸附性能。操作步驟如下:
(1)紅細胞鞣化和緻敏 取醛化紅細胞用0.15mol/L的PBS(pH7.2)離心洗滌2次,沉澱用PBS配成2.5%懸液;加等量1∶2000鞣酸溶液(鞣酸不同批号,質量相差較大必須預試測定适宜濃度)37℃孵育20min,經常搖動;離心去上清液,用PBS洗1次,再用0.15mol/L的PBS(pH6.4)配成10%懸液;每份懸液加等量适當稀釋的抗原液,置于37℃水浴箱中30min(每5min振動1次),離心去上清液,用PBS(pH7.2)洗2次,再用含1%正常兔血清(NRS)和10%蔗糖緩沖液配成5%細胞懸液。加0.1%疊氮化鈉防腐,存于4℃或減壓凍幹備用,每批緻敏細胞均需用已知陽性和陰性血清滴定靈敏度或特異性。陽性滴度在1∶640以上,陰性血清不出現反應者可用。
(2)微量血凝試驗 在U形(或V形)微量血凝闆上,将被試血清用1%NRS或牛血清白蛋白(BSA)生理鹽水做倍比系列稀釋,每孔含稀釋血清0.05mL。每孔加0.01mL緻敏紅細胞懸液(可用标定過的注射器針頭滴加),充分振蕩搖勻,加蓋于室溫靜置1~2h讀取結果。
根據紅細胞在孔底的沉積類型而定。“-”,紅細胞沉于管底,呈圓點形,外周光滑;“±”,紅細胞沉于管底,周圍不光滑或中心有白色小點;“+”,紅細胞沉積範圍很小,呈較明顯的環形圈;“++”,紅細胞沉積範圍較小,其中可出現淡淡的環形圈;“+++”,紅細胞布滿管底,呈毛玻璃狀;“++++”,紅細胞呈片狀凝集或邊緣卷曲。呈明顯陽性反應(+)的最高稀釋度為該血清的滴度或效價。間接紅細胞凝集試驗檢測腦脊液或血清抗體滴度大于正常參考值上限,即血清凝集滴度<1∶8,腦脊液<1∶2,可診斷為腦囊蟲病,陽性率為78%~91.4%。
5.3.2 酶聯免疫吸附試驗
目前尾蚴病最可靠的診斷方法是酶聯免疫吸附技術。早期建立的酶聯免疫吸附試驗(ELISA)被廣泛地應用在豬囊尾蚴病的診斷上。在該基礎上又發展了斑點酶聯免疫吸附試驗、生物素親和素酶聯免疫吸附試驗、抑制性酶聯免疫吸附試驗等。此外,還成功開發了采用酶聯免疫原理和膠體金層析技術制備的囊尾蚴病快速診斷金标試紙條技術。酶聯免疫吸附試驗檢出率高、特異性強、穩定性好,已經被列入我國動物檢疫規程,具體操作步驟如下:
(1)被檢豬全血血片将10cm×1cm普通濾紙條的一端标記被檢豬号碼,另一端吸取被檢豬任何部位血液1~2滴,于室内陰幹後,置于4℃冰箱内(可保存6個月)。
(2)用抗原包被液洗滌ELISA反應闆各孔3次。以抗原包被液将抗原按使用說明書稀釋至工作濃度加至ELISA反應闆各孔内,每孔0.1mL,加蓋後置于室溫(11~29℃)過夜。
(3)用力甩淨包被過夜的ELISA反應闆孔内的抗原包被液,每孔加入洗滌液,浸泡3min後,用力甩去洗滌液,并用濾紙吸去殘留的洗滌液和驅除孔内氣泡,重新加入洗滌液,按同樣方法共洗滌3次,即3×3min沖洗。
(4)将被檢血片、标準陰性血片及标準陽性血片均剪成1cm×1cm大小,分别置于青黴素瓶内,每1cm×1cm血片加入稀釋液0.3mL,浸泡20min,即血片變白後即可。
(5)每份被檢血片浸液加2孔,每孔0.1mL。标準陰性、标準陽性對照孔加相應血片浸液2孔,每孔0.1mL。空白對照孔加稀釋液2孔,每孔0.1mL。加樣後加蓋,于室溫(11~29℃)放置30min後按(2)方法用洗滌液洗滌。
(6)辣根過氫化物酶标記的金黃色葡萄球菌蛋白A(HRP-SPA)标準物按使用說明書以稀釋液稀釋至工作濃度。被檢孔、标準陰性孔和标準陽性孔,每孔加HRP-SPA标記物0.1mL。空白對照孔亦加0.1mL。加完後加蓋,于室溫(11~29℃)放置30min後按(2)方法用洗滌液洗滌。
(7)每孔加現配制的底物溶液0.1mL,于室溫(11~29℃)放置10min。
(8)每孔加終止液2滴,以終止反應。
(9)判定在對照孔成立的前提下,即在标準陽性孔呈深黃色,标準陰性孔呈無色或淺黃色,空白孔呈無色,判定檢測結果。先目測判定:與标準陰性孔相比,顔色深于标準陰性孔,即判定為ELISA陽性病豬(+)。還可以用酶聯免疫檢測儀判定(490nm)。以空白對照孔調零,測定被檢孔OD值。當OD≤0.22,判定為ELISA陰性(-);OD≥0.26,判定為ELISA陽性(+);當0.23≤OD≤0.25,判定為ELISA疑似(±),疑似者複檢一次,仍為疑似則判為陽性。
囊尾蚴抗體檢測隻反應有寄生蟲存在,而抗原檢測能表明體内寄生蟲是活的。最理想的情況是兩者的結合試驗。血清學試驗用的各種天然抗原來源于囊液,這些天然抗原還可以作為有用的血清學篩查工具。不同的方法使用不同的可溶性抗原使試驗結果難以對比。囊尾蚴病檢測抗原多為豬囊尾蚴囊液粗抗原或層析純化抗原,主要包括以下幾類:①小扁豆凝集素純化抗原成分(豬囊尾蚴13ku、14ku、18ku、21ku、24ku、39~42ku或50ku糖蛋白);②囊尾蚴囊液抗原成分;③頭節囊壁抗原成分。
囊尾蚴感染人或動物後,在血清、腦脊液、口水甚至淚水中都可以檢測到相應的抗體。放射免疫、血凝試驗、膠體金、補體結合、酶聯免疫反應和免疫印迹技術等已經用于檢測感染的人或動物的囊尾蚴病抗體。最初抗原是來源于囊液、排洩物G分泌物(ES)産品或粗勻漿,這些未純化的抗原敏感性和特異性較差,易出現假陽性、假陰性和交叉反應;因此開發使用提純的抗原或在囊液中尋找特異性抗原。目前特異性最好的方法是酶聯免疫電轉移印迹(EITB)技術,最初報道有100%的特異性、98%的敏感性。然而,這種方法在大腦單囊腫病的診斷中敏感性大幅下降。Prabhakaran等報道了一種敏感的免疫診斷方法(用尿素誘導的扁豆凝集素的三級構象)。用這種方法對60例豬囊尾蚴病的患者進行診斷,檢測到其中46%的患者血清中存在抗體,而用标準免疫印迹診斷方法檢測為陰性。這個商品化的EITB試劑盒可以直接購買到,已經廣泛用于診斷人類和豬囊尾蚴病,但是該方法也存在一定的弊端,如抗原來源不能保證,抗原的制備困難,抗原之間存在差異,探針雜交技術成本昂貴等。為解決這些問題,對這些抗原進行鑒定、分析并人工合成,用LISA進行豬囊尾蚴病的診斷測試。通過ELISA檢測,發現這些合成的蛋白質特異性和敏感性遠低于天然的糖蛋白抗原(LLGP)蛋白。Prasad報道了一種新的檢測囊液抗原誘導的淋巴細胞增殖反應的免疫診斷技術。該技術基于囊腫液抗原,通過淋巴細胞增殖試驗來衡量囊尾蚴刺激機體産生的細胞免疫反應。研究人員報道,測試組48個和對照組79個的特異性和敏感性分别為93.8%和96.2%。
檢測囊尾蚴的另外一種方法就是進行抗原的檢測。目前科研人員已經建立了幾種檢測方法用于檢測血清中的囊尾蚴抗原。B158/B60和HP10兩個單克隆抗體已經通過驗證并且用于常規檢測囊尾蚴抗原,據報道其敏感性非常高,血清樣品達80%,腦脊液達90%。在豬囊尾蚴病流行病學調查中,研究人員統計了B158/B60和HP10的靈敏度和特異性,B158/B60和HP10的靈敏度分别為84%和76%,特異性分别為55%和83%。B158/B60在人類的尿抗原檢測中也有良好的診斷性能,寄生蟲敏感性為92%(而單囊尾蚴感染的病例下降到62.5%)。隻有鈣化的囊尾蚴的大多數病人(83%)檢測結果陰性。血清和尿液的診斷結果一緻性非常好,所以在檢測過程中可以用尿或唾液作為診斷樣品替代腦脊液、血清樣品,可大大簡化囊尾蚴病的篩檢流程。
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