色譜（chromatography）是分析測試物質理化性質的常用的有效手段，多用于生物分子及高聚物的分離檢測等。

色譜包含多種操作方式不同但原理相同的分離、分析技術。按其流動相和固定相狀态不同分為氣相色譜和液相色譜。

氣相色譜儀流程

你一般看到的氣相色譜儀是長這樣的。

色譜儀

以氣相色譜儀為例，主要由三大部分構成：載氣、色譜柱、檢測器。每一模塊具體工作流程如下。

注射器

氫焰檢測器

Size exclusion chromatography（SEC）

體積排阻色譜法（SEC）是利用多孔凝膠固定相的獨特特性，主要依據分子尺寸大小的差異來進行分離的方法，樣品分子與固定相之間不存在相互作用。

根據所用凝膠的性質，可以分為使用水溶液的凝膠過濾色譜法（GFC）和使用有機溶劑的凝膠滲透色譜法（GPC）。

隻依據尺寸大小分離，大組分最先被洗提出

原理：色譜固定相是多孔性凝膠，隻有直徑小于孔徑的組分可以進入凝膠孔道。大組分不能進入凝膠孔洞而被排阻，隻能沿着凝膠粒子之間的空隙通過，因而最大的組分最先被洗提出來。

直徑小于孔徑的組分進入凝膠孔道

小組分可進入大部分凝膠孔洞，在色譜柱中滞留時間長，會更慢被洗提出來。溶劑分子因體積最小，可進入所有凝膠孔洞，因而是最後從色譜柱中洗提出。這也是與其他色譜法最大的不同。

依據尺寸差異，樣品組分分離

體積排阻色譜法适用于對未知樣品的探索分離。凝膠過濾色譜适于分析水溶液中的多肽、蛋白質、生物酶等生物分子；凝膠滲透色譜主要用于高聚物（如聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯）的分子量測定。

Ion exchange chromatography（IEC）

離子交換色譜是利用被分離組分與固定相之間發生離子交換的能力差異來實現組分分離。

離子交換色譜主要用于分離離子或可離解的化合物。

原理：固定相為離子交換樹脂，樹脂分子結構中存在許多可以電離的活性中心。流動相最常使用水緩沖溶液，也有有機溶劑如甲醇，或乙醇同水混合。

初始平衡狀态

流動相帶着樣品組分電離生成的離子通過固定相時，待分離組分中的離子與樹脂分子結構中可電離的活性中心發生離子交換，形成離子交換平衡，從而在流動相與固定相之間形成分配。

樣品組分與活性中心發生離子交換

固定相的固有離子與待分離組分中的離子之間相互争奪固定相中的離子交換中心，并随着流動相的運動而運動，最終實現分離。

洗提過程

洗提過程

Affinity chromatography（AFC）

親和色譜法是利用與固定相不同程度的可逆結合的親和性，使成分與雜質分離的色譜法。固定相為相互間具有高度特異親和性的二種物質之一。

初始平衡狀态

親和吸附

不同分子與固定相間親和力大小有差異，選擇适當的洗脫條件便可将混合物中的組分逐個洗脫下來，達到分離純化的目的。

解吸附

主要用于分離活體高分子物質、過濾性病毒及細胞。優點是操作簡便、效率高、條件溫和，缺點是使用局限性大。

Hydrophobicinteraction chromatography（HIC）

Hydrophilicinteraction chromatography （HILIC）,similar to normal phase chromatography （NPC）。

Reversed phasechromatography （RPC）。

Mixed modechromatography。

色譜儀的選用依據：

1、相對分子質量

相對分子質量小于200、揮發性比較好的化合物，可用氣相色譜儀剖析。

相對分子質量在200～2000的化合物，可用液-液分配色譜儀、液-固吸附色譜儀和離子交換色譜儀剖析。

相對分子質量大于2000的化合物，可用凝膠色譜儀剖析。

2、溶解性

水溶性樣品選用離子交換色譜儀和液-液分配色譜儀剖析。

微溶于水，但用酸或堿能很好電離的化合物，可用離子交換色譜儀剖析。

油溶性和非極性的樣品，可選用液固吸附色譜儀。

3、化學構造

含有離子型或可離子化的化合物，或者能與離子型化合物相互作用的化合物（如配位體和有機螯合劑），可首要考慮用離子交換色譜儀，或液-液分配色譜儀和凝膠色譜儀。

具有不同官能團的化合物、同系物，可用液-液分配色譜儀剖析。

異構體可用液固吸附色譜儀剖析。

高分子聚合物可用凝膠色譜儀。

資料來源：測了麼

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