想了解腦神經研究最新、熱門技術？

想知道腦刺激主要有哪些分類？

腦機接口技術如何開展工作？

腦機接口技術應用及進展目前是怎樣？

「全線賦能“沃”的實驗」之實驗方法實戰教程

直播第七期為大家帶來

《腦刺激及腦機接口》

從技術原理、類别介紹和應用方向

到技術進展，為你開闊研究新思路

直播時間

7月19日（周二）19：00

報名方式

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主題：腦刺激技術

• 經顱電刺激
• 經顱磁刺激
• 感覺刺激
• 深部腦刺激
• 光遺傳刺激

講師：周正

瑞沃德高級産品方案經理，專注于神經環路研究，在疼痛及漸凍症模型制備，腦刺激/光纖記錄/在體電生理實驗上有着豐富的經驗，緻力于為客戶提供專業的神經信号實驗方案。

主題：腦機接口技術

• 無創式腦機接口
• 半植入式腦機接口
• 全植入式腦機接口

講師：宋思賢

中國科學院大學碩士研究生，專注于腦機接口研究，特别是無創式腦機接口和全植入式腦機接口，研究方向主要為神經信号處理和環路解析。

上期直播間互動問題

這次我們全部為小夥伴解答

1. PCR實驗重複性很差是什麼原因呢？

答：這個看是哪類重複性很差。

如果是同個批次内的複孔重複差，第一個主要原因：以加樣操作不準确導緻，可以使用排槍或規範移液槍使用來減少操作誤差，還有需要定期對移液槍進行校準哦；第二個原因：儀器使用年限過長，PCR儀器的每個孔的溫度存在差異，這個需要檢修校準；第三個原因：模闆濃度太低，樣品初始濃度越低,，重複性越差，應減少樣品的稀釋倍數。

如果是不同批次間的重複差，除卻以上原因，還存在試劑上的批次差異，應當減少試劑批次和種類的差異，盡量選擇同一生産商同一批次的産品進行。

2.請問我的标準曲線擴增不出來是怎麼回事？

答：這個隻能例舉一些情況，需要進行排查。首先可以使用一個明确知道是正常PCR體系（陽性對照）進行測試，這樣排查下是否是PCR試劑儀器等因素，第二，由于是标準曲線，标準樣DNA模闆，用NanoDrop或者Qubit核酸蛋白定量儀檢查模闆質量和濃度。

3.出現片狀拖帶該怎麼解決呢？

答：首先出現片狀帶往往是因為PCR體系中DNA酶過量、鎂離子濃度過高或者退火溫度低，循環次數等原因造成，需要挨個排查，退火溫度可以通過設置退火溫度梯度去摸索其條件，往往需要提高退火溫度，PCR體系的問題可以适當減少PCR體系中酶、鎂離子的用量。循環次數可以适當減少也可以避免一些情況。這些條件都需要摸索。此外，也可能是DNA電泳的瓊脂糖凝膠問題，需仔細排查。

4.如何判斷假陰性或假陽性？

答：PCR實驗中，假陽性的發生率比假陰性的發生率要低，這是因為往往PCR引物設計時候是特異性高的引物，往往可以根據擴增條帶在DNA電泳下的條帶大小進行産物長度的判定來驗證，此外，排除假陽性的結果往往都是擴增産物進行測序驗證可以進一步論證其結果可靠性。

假陰性的結果就比較複雜了，一般會設計一個陽性對照實驗，來排除PCR體系中試劑本身失效或者PCR儀器帶來影響，然後還需要檢查實驗過程所使用DNA模闆的情況，一般NanoDrop或者Qubit核酸蛋白定量儀檢查模闆質量和濃度。

5.如何确定設置的PCR的體系是正确的呢?

答：設置陽性對照往往是一個不錯的選擇，可以檢查PCR體系中試劑（比如酶的活性）是否能正常使用。此外引物與模闆情況，如果嚴謹，可以檢查引物與模闆的質量和濃度，再者就是一個合适的退火溫度，可以設置溫度梯度進行PCR，然後DNA電泳後觀察條帶情況來進行選擇合适的退火溫度。最後就是确定擴增産物的正确性，是DNA電泳判讀擴增條帶長度是否準确，其次是膠回收進行擴增産物的測序驗證。

6.如何确定引物的濃度？

答：這個需要根據情況，引物合成公司會首先提供每個引物的原始儲存濃度，然後根據其濃度加入雙蒸去離子水稀釋，稀釋成PCR體系使用的濃度，然後就是換算問題，一般引物合成公司會給一個度量指标是OD，一般來說會附帶一個說明書，一般1OD是5nmol，也就是說加入500uL水後就是10umol/L，根據PCR體系推薦的引物摩爾數，計算1uL引物加入也就是10pmol的量，這塊往往這個根據PCR試劑盒會有推薦引物濃度（根據PCR體系不同進行調整）。

7.PCR擴出來的條帶亮度很弱，如何排查原因呢？

答：一般擴出來條帶是正确大小長度下還是很弱的亮度的話，往往是擴增效率不高，這個可以首先加入陽性對照，确保儀器和PCR試劑盒如酶是正常的。第二要考慮DNA模闆的問題，先檢查模闆質量和濃度，濃度過低條帶暗，濃度過高，PCR反應會受到抑制，擴增效率不高，還有DNA純度不高也會影響擴增效率。第三，退火溫度，這塊可以設置一個退火溫度梯度進行試驗，确定最佳退火溫度，最後，就是引物的問題，引物設計不太好，存在引物自身或引物間的互補配對情況。

8.如何設計引物，注意事項有哪些呢？

答：引物設計的原則非常多，需要考慮的因素很多，但是其最大的原則是特異性！

特異性：必須要保證引物與非特異擴增序列的同源性不要超過70%或有連續8個互補堿基同源。

長度：一般引物長度在15-30bp，有時候可能因特殊原因50bp也可。

GC含量：一般40%-60%。

堿基随機分布：引物堿基序列分布盡量随機，不要連續很多個相同堿基。

引物的二級結果應當避免：引物自身、或者兩個引物間，盡量不要有互補結構。

引物的3′端必須高度保守：引物3′端務必與模版完全匹配，特别是最後一個堿基。這樣DNA酶才能順利匹配模闆DNA進行複制延伸。

引物的5′端可以進行修飾：可以加入酶切位點，标記熒光、生物素等，也可以設計引入突變位點等情況。

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