菌懸液的制備方法? 在進行培養基的驗收，檢驗培養基的靈敏度、生長率時，都需要用到定量菌株細菌的個體很小，肉眼無法直接看到，我們所看到的培養基平闆上的菌落、渾濁的液體培養基，都是數以億計的細菌集合體在初次進行低濃度定量菌株菌懸液（10-100CFU/mL或20-200CFU/mL）制作時，通常都會感覺無從下手，接下來我們就來聊聊關于菌懸液的制備方法?以下内容大家不妨參考一二希望能幫到您!

菌懸液的制備方法

在進行培養基的驗收，檢驗培養基的靈敏度、生長率時，都需要用到定量菌株。細菌的個體很小，肉眼無法直接看到，我們所看到的培養基平闆上的菌落、渾濁的液體培養基，都是數以億計的細菌集合體。在初次進行低濃度定量菌株菌懸液（10-100CFU/mL或20-200CFU/mL）制作時，通常都會感覺無從下手。

下面就為大家介紹常用的定量菌株菌懸液制備方法：十倍稀釋法。

1、将生理鹽水（或磷酸鹽緩沖液等）分裝至試管中，每支裝量為9mL（百倍稀釋可用10mL，特殊情況也可使用9mL做近似百倍稀釋），進行滅菌處理（121℃滅菌15-30min即可）；

注：在進行厭氧菌（如生孢梭菌，産氣莢膜梭菌）稀釋時，選用0.1%蛋白胨水或pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液做為稀釋劑效果更佳；若不在厭氧環境中操作，從開始稀釋至使用菌懸液結束要控制在15min以内，時間過長會導緻菌體死亡。

2、将滅菌後裝有9mL生理鹽水的試管編号1，2，3，4，5，6，7，8。

3、将一定量的菌加入至編号1的試管中制成第一稀釋梯度菌懸液（通常稱為10-1梯度），使用旋渦振蕩器混勻。

4、吸取1mL10-1梯度菌懸液至編号2的試管中，混合均勻，就得到了第二稀釋度的菌懸液（通常稱為10-2梯度，若吸取10-1梯度菌懸液100μL至10mL生理鹽水管中，即為百倍稀釋，可以直接得到10-3梯度菌懸液）。

5、以此類推，可以得到10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8梯度菌懸液，每一支管的含菌量都是前一直管的1/10，第8支管的菌液濃度就是第1支管的千萬分之一了，如果第一支試管含菌量是109CFU/mL，第8支管就可以得到100CFU/mL左右濃度的菌懸液了。

現在稀釋方法有了，那麼如何制備第一支試管的菌懸液及确定第一支試管中菌液的濃度呢？一般采用以下四種方法：

1.麥氏比濁法

将一定量培養好的細菌轉移到第一支試管中（可以用菌液，可以挑取菌落），制備成約5麥氏濁度的均一渾濁的菌懸液（約109CFU/mL），稀釋即可。

優點：新手可直接上手操作

缺點：不同細菌體積大小有差别，有些芽孢菌容易聚成團塊不易制得均一懸液；不适用于真菌孢子懸液制備；

注意事項：不同細菌的麥氏濁度與濃度之間存在差異，第一次試驗之前最好先進行驗證；麥氏濁度無法區分細菌死活，因此最好使用新活化的菌制備；真菌（酵母菌）體積較大，同等濁度下濃度約為細菌的1/20。

2、吸光度法

細菌在600nm波長處具有最大吸光度，在一定濃度下，細菌的濃度與OD600nm呈正比關系，因此可以通過測量OD600nm值來确定菌懸液濃度。此方法更常用于測定菌液濃度（觀察細菌生長曲線），也可在制備105-107CFU/mL的菌懸液時使用，不适用于低濃度菌懸液制備。

3、菌液稀釋法

将菌株接種至非選擇性肉湯培養基中過夜培養，吸取1mL培養物至9mL生理鹽水中制成10-1梯度菌懸液（約108CFU/mL），稀釋至10-6或10-7即可得到10-100CFU/mL菌懸液。

優點：操作簡單

缺點：菌數不穩定，受細菌種類、培養基影響較大；僅适合均勻渾濁生長的細菌或真菌；若培養過程發生污染，不易察覺。

注意事項：不同菌株生長時間不同，在不同培養基中生長濁度也不同，如大腸埃希氏菌在TSB中過夜培養即可，乳酸菌通常需在MRS肉湯中培養48-72h，酵母菌需在SDB培養基中培養3-5天。

4、菌苔稀釋法

從平闆或斜面上挑取一定量的菌苔（2-3mm單個菌落，菌落偏小可多挑幾個菌落）至9mL生理鹽水中振蕩均勻，制成10-1梯度菌懸液（約108CFU/mL），稀釋至10-7或10-8即可得到10-100CFU/mL菌懸液。

優點：操作簡單，相比較于其他稀釋方法，最大優勢就是更容易準确控制菌數濃度；适用範圍廣，細菌、真菌均可采用此方法制備菌懸液。

缺點：需要嘗試和經驗

注意事項：不同菌株制成的菌懸液濃度同樣存在差異，初次進行特定菌株稀釋時需要做驗證；一般非芽孢細菌制成的10-1梯度菌懸液約為108-109CFU/mL，而芽孢菌和酵母菌制成的10-1梯度菌懸液約為106-107CFU/mL。

總結：

初次進行菌液制備時，可以選用方法1和方法4，多做幾個稀釋度測試，熟練有經驗後使用方法4進行菌液制備，可輕松準确制得10-100CFU/mL或20-200CFU/mL濃度菌懸液。

制備好的菌懸液可在驗證過的時間内使用，使用時間一般與稀釋劑有關，若使用了含蛋白胨的稀釋劑，放置時間過長會出現細菌增殖的情況。一般情況下：

a.普通細菌建議在45min-2h内使用。

b.厭氧菌建議在15min内使用，

c.用生理鹽水制備的黴菌的孢子懸液可在2-8℃放置1個月至更長時間。

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